Rsf-1在肺癌中的表达与其对肺癌迁移侵袭能力的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· Rsf-1在肺癌中的表达及其对肺癌迁移侵袭能力的影响 刖 吾 近年来肺癌发病率持续升高，已成为恶性肿瘤死因的第一位。而大部分肺癌 患者死于肿瘤的转移和复发，因此发现肺癌侵袭、转移的关键靶点具有重要意义。 蛋白分子伴侣调整复合物与DNA的结合活性，同时hSNF2H利用其ATP酶活性 和解螺旋酶活性参与核小体的移动和DNA的解螺旋。RSF复合物动员核小体调节 染色质的结构以适应各种生长信号和环境变化的需求。已报道这种核小体的改变 也发生在其他ISWI复合物和SWI／SNF复合物中，且它在转录的激活或抑制， DNA的复制，细胞周期的进展中有～定作用。越来越多的证据表明染色质重塑参 与调控细胞的恶性转化和肿瘤进展。有研究证实在多个肿瘤组织中包括卵巢癌、 乳腺癌、膀胱上皮癌、结肠癌、胃腺癌、口腔鳞癌、非小细胞肺癌等Rsf-I异常过 表达，且其高表达与增殖、侵袭转移相关参数及预后相关。提示Rsf-1在肿瘤的增 殖、侵袭转移等方面起一定的作用。已有报道显示在有Rsf-1表达的卵巢癌，结肠 癌，直肠癌，非小细胞肺癌细胞系中Rsf-1可促进肿瘤细胞的增殖。 但是Rsf-1在非小细胞肺癌中的表达情况与预后的关系未见文献报道，其对 肺癌细胞运动侵袭的作用及其作用机制还不清楚。本课题拟通过免疫组化，western 探讨Rsf-1对肺癌细胞侵袭转移能力的影响及可能的机制和信号途径，为肺癌的 诊断和治疗提供新的基因靶点。 材料和方法 l、组织来源 具有完整随访资料的61例非小细胞肺癌及相应正常肺组织标本均来自2005 年到2007年在中国医科大学附属第一医院实行手术的病人，所有标本经病理学检 查确诊，并经中国医科大学附属第一医院伦理委员会批准及患者知情同意。组织 经10％中性福尔马林固定、石蜡包埋。患者术前均未接受放化疗。随访时间截止 至2012年5月。 2、免疫组织化学染色 将石蜡组织块切成41un厚切片，脱蜡，水化，按S-P法说明操作。抗Rsf-1 USA)，DAB显色，苏木素复染细胞核。同 的单克隆抗体(1：1000，Upstate， 时以PBS代替一抗作为阴性对照。两名病理诊断医师分别对组织切片染色情况进 行评分。结果判定：Rsgl以细胞核染色为阳性细胞。根据阳性肿瘤细胞百分比： 4分。同时根据染色强度：阴性或浅黄色记为0分，黄色记为1分，棕褐色颗粒 记为2分。着色细胞数得分乘以着色强度得分为Rsf-1得分。我们将得分为0。3分 记做Rsf-1低表达，得分为4—8分记做Rsf-1高表达。 3、细胞培养与siRNA干扰 jie教授的友好惠 细胞库获得。PG．BEI(BEl)，PG—LH7(LH7)细胞系来自zbeng AGZY83a细胞系购自上海拜利生物科技有限公司，这12种细胞系用含10％胎 牛血清的RPMll ％C02的条件下培养。Rsf-1 siRNA购自Santa。转染前24小 siRNA(h)与control 时将细胞按50％密度接种于6孔板，采用lip02000转染试剂进行转染，转染后72 小时Westernblot检测干扰效率。 4、Western Blot和细胞浆／核蛋白提取 提取上清为总蛋白。按细胞浆／核提取试剂盒提取细胞浆和细胞核蛋白。考马斯亮 B、Rho—A、Rho—B、 Rho—C、E—c司harin(1：100，SantaCruz)，Snail(1：250，CellSignaling，Boston， 000，Santa MA，USA)和13-actin、GAPDH(I：1Cruz)4。C孵育过夜，分别与对应的 二抗(1：1000，Santa 2 System(UVPInc，Upland，CA，USA)采集。 5、细胞迁移和侵袭能力检测 1 后，预冷甲醇室温固定15min，用棉签轻擦掉上表面的细胞