WboA基因在布鲁菌S2株诱导机体免疫应答中的作用.pdfVIP

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2019-08-07 发布于安徽
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WboA基因在布鲁菌S2株诱导机体免疫应答中的作用.pdf

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摘要摘要 - 目的：以来源于我国常用的猪布鲁菌弱毒疫苗 S 株的 WboA 基因缺陷株(简称 WboA S 2 2 - 株) 为实验菌株，并以 S 株作为对照，体外观察 WboA S 株和 S 株感染后的巨噬细胞 2 2 2 （macrophage, MΦ）和树突状细胞（dentritic cell, DC ）形态学变化、吞噬率、细胞凋亡、细胞因子产生及对 T 细胞的激活作用，探讨 WboA 基因编码产物在诱导机体抗感染免疫中的作用，为以 WboA 基因作为靶基因的新型布鲁菌疫苗的研制提供实验依据。方法： 1．WboA基因编码产物在布鲁菌感染MΦ、BMDC 中的作用制备小鼠腹腔MΦ和骨髓源性树突状细胞(BMDC) 。用猪布鲁菌 - WboA S 菌株以MOI 2 100：1，分别感染小鼠腹腔MΦ和BMDC ，并以S 株作为对照，观察感染后的MΦ、BMDC 2 的形态学变化(1h、12h、24h) 、吞噬率、载菌量(1h、6h、12h、24h) 、凋亡率及分泌的细胞因子(24h、48h 、72h) 的变化。 -S 菌株刺激的 BMDC 和 MΦ提呈抗原作用 2 ．WboA 2 - 将感染 WboA S 菌株的 BMDC 和 MΦ分别与 T 细胞共培养，并以 S 菌株作为对照， 2 2 观察共培养后不同时间点(24h、48h 、72h)细胞上清中 IFN-γ 和 IL-4 水平的变化，以明确 WboA 基因编码产物在 BMDC 和 MΦ提呈抗原、激活 T 细胞中的作用。结果： -S 菌株和 S 菌株感染 MΦ和 BMDC 后的形态学变化 1. WboA 2 2 瑞氏-吉姆萨染色光学显微镜下观察：感染后 1 h，MΦ 内空泡增多增大，胞质内可 - - 见大量布鲁菌，WboA S 感染的 MΦ细胞膜较 S 株组完整；感染后 12 h，WboA S 和 S 2 2 2 2 感染的 MΦ胞质内仍见大量细菌，胞膜仍完整；感染后 24 h ，S 感染 MΦ胞膜消失， 2