L-苹果酸测定试剂盒.docVIP

北京百奥康生物技术有限公司 北京市通州工业园云景东里361-622 邮编：101101 电话/传真：010E-mail:lu_chuncheng@ L-苹果酸测定试剂盒 (L-MALATE) 操作说明书 K-LMALR (58次测定) K-LMALL (116次测定) 简介: L-苹果酸广泛存在于葡萄酒、啤酒、面包、果汁和蔬菜制品中，是果酸中的最重要的一部分成分，对于葡萄酒酿造工业，L-苹果酸和L-乳酸是两项非常重要的监测指标。 Megazyme公司提供多种L-苹果酸测定方法，其中我们提供的MegaQuantTM 计量仪具有价格便宜、使用简单、结果准确等特点，适合众多的实验室使用。 原理: 测定L-苹果酸需要进行两步酶解反应，第一步：在L-苹果酸脱氢酶(L-MDH)的催化作用下，L-苹果酸被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸 (1) L-苹果酸 + NAD+ (L-MDH) oxaloacetate + NADH + H+ 第二步：加入过剩的L-谷氨酸，在谷草转氨酶的作用下，生成L-天门冬氨酸和2–酮戊二酸 (2) Oxaloacetate + L-glutamate (GOT) L-aspartate + 2-oxoglutarate 生成的NADH的量取决于L-苹果酸的量，NADH的吸光度值可在340下测量。 基于此原理的方法被IFU,AIJN, MEBAK和OIV广泛推荐使用，并得到了AOAC的认可，在欧洲众多的国家中都被作为国标方法使用。 特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度: 该实验方法是专门用于测定L-苹果酸含量的。 最小可调吸光光度为0.005个吸光单位，样品体积为2.00 mL（或对于浓度为2.49 mg/L样品体积为0.10 mL），若在340nm下检测,此时的L-苹果酸浓度为0.12 mg/L。如果最小可调吸光光度为0.010吸光光度，样品体积为2.00 mL，在340nm下检测,此时的L-苹果酸检测线为0.25 mg/L。 该实验的测量范围为0.5-30ugL-苹果酸，同一样品分别进行两次测定，其吸光度值会有0.005-0.010吸光单位的变化，对于样品体积为0.10 mL，此时的L-苹果酸浓度大约在2.49-4.98 mg/L之间，如果样品是经过稀释的，在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数（F）,如果在样品制备阶段，样品的重量是被称量的，如：10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨。 干扰: 如果L-苹果酸在试验规定的时间内（大约3分钟）完成转化过程，通常认为没有干扰发生，然而，通过向已完成反应的试管中添加L-苹果酸（0.1mL中添加15ug），进一步的验证实验，吸光度值还将进一步增加。 利用附带的内部的标准质控可以对干扰物质进行鉴定。定量回收试验：通过向样品中添加标准质控，计算样品在处理和提取时的损失。如：在最初的提取步骤时添加一定量的L-苹果酸。试剂中合成的PVP可以有效的防治样品中多酚（丹宁酸）对试验的抑制 安全性: L-苹果酸测定所使用的试剂没有有毒物质。然而浓缩缓冲液中含有作为防腐剂用的叠氮化钠(0.02 % w/v)，需要按照实验室安全操作规程进行试验。 试剂盒: MegazymeL-苹果酸含量测定试剂盒可以进行58次/116次的测定试验，并提供有全部的试验方法： 58次测定试剂盒(cat. no. K-LMALR) 瓶1: 双甘氨肽缓冲液 (6 mL, 1.0 M, pH10.0) +L-谷氨酸1 M)+叠氮化钠(0.02 % w/v) 稳定性 2年，4°C保存。 瓶2: NAD+(380 mg)+ PVP (60 mg) 稳定性 5年，-20°C保存。 瓶3: 谷草转氨酶(600 U/mL)，悬浮液1.25 mL. 稳定性 2年，4°C保存。 瓶4: L-苹果酸脱氢酶(1.25 mL, 15,000 U/mL) 稳定性 2年，4°C保存。 瓶5: L-苹果酸质控标准液(5 mL, 0.15 mg/mL) 稳定性 2年，4°C保存。 116次测定试剂盒(cat. no. K-LMALL) 瓶1: 双甘氨肽缓冲液 (12 mL, 1.0 M, pH10.0) +L-谷氨酸1 M)+叠氮化钠(0.02 % w/v) 稳定性 2年，4°C保存。 瓶2: NAD+(380 mg)+ PVP (60 mg) 稳定性 5年，-20°C保存。 瓶3: 谷草转氨酶(600 U/mL)，悬浮液2.5 mL. 稳定性 2年，4°C保存。 瓶4: L-苹果酸脱氢酶(2.5 mL, 15,000 U/mL) 稳定性 2年，4°C保存。 瓶5: L-苹果酸质控标准液(5 mL, 0.15 mg/mL) 稳定性 2年，4°C保