高中生物第一章基因工程1.2基因工程的基本操作程序讲义新人教版选修材料.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序 （二） 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内稳定存在和表达的过程。 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 1、将目的基因导入植物细胞 （1）导入细胞的种类 （2）导入方法 农杆菌转化（最常用） 体细胞 双子叶植物和裸子植物 其他植物可用酚类物质处理后用农杆菌转化 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 1、将目的基因导入植物细胞 （2）导入方法 基因枪法 花粉管通道法 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 2、将目的基因导入动物细胞 （1）导入细胞的种类 （2）导入方法 显微注射法 最好是受精卵细胞 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）微生物作为受体的优势 （2）导入方法 Ca2+处理 ①繁殖速度快，可大量生产 ②生产成本低 胰岛素原的人工合成 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 3、将目的基因导入微生物细胞 （3）原核生物作为受体细胞产生的蛋白质没有空间结构，需要在体外加工。 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 导入方法 农杆菌转化法（最常用） 基因枪法 花粉管通道法 显微注射法 Ca2+处理法（感受态细胞） 受体细胞 受精卵或 体细胞 受精卵 原核细胞（细菌） 1.2 基因工程的基本操作程序 第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→Ca2+处理导入农杆菌细胞→侵染植物细胞→目的基因整合到受体细胞的染色体上DNA上→植物组织培养→试管苗表达目的基因→产生相应性状。 将含有目的基因的表达载体提纯→取受精卵→显微注射→获得导入目的基因的受体细胞→早期胚胎培养→胚胎移植→获得新性状的动物。 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组的基因表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子完成转化→目的基因表达，获得新性状。 1.2 基因工程的基本操作程序 第四步：目的基因的检测与鉴定 抗虫鉴定、抗病鉴定活性鉴定等 抗原－抗体杂交法 分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有 转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 琼脂糖电泳 转移至硝酸纤维素膜上 与放射性标记DNA探针杂交 放射自显影 带有DNA片段的凝胶 凝胶 滤膜 用缓冲液转移DNA 吸附有DNA片段的膜 DNA分子杂交 32P-抗体 裂解细胞，表达蛋白转移到硝酸纤维素膜上 与放射性抗体杂交的蛋白质斑点 转化到E.Coli 细菌启动子 插入的真核DNA片段 放射自显影 重组体 抗原-抗体杂交