手性柱使用方法及手性方法过程.pptVIP

Daicel手性色谱柱一览表 第二代手性色谱柱 特性 1) 5 微米硅胶用于获得高的理论塔板数 2) 适用于痕量分析 3) 采用15cm长的手性柱可节省分析时间 AS vs. AS-H (中性组分) AS vs. AS-H (碱性组分) AS vs. AS-H (酸性组分) OJ vs.OJ-H (痕量分析) ?柱尺寸 ： 0.46cmI.D. x 25cmL ?样品： 1-Phenyl ethanol ?条件 流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 ＝ 90 / 10 温度 ： 25 °C 流量 ： 1.0 ml/min. 检测波长 ： UV 254nm AD vs. AD-H (痕量分析) CROWNPAK CR(+) 的拆分实例 CHIRALPAK? IA与IB研发背景 CHIRALPAK? IA, IB 的基本特征 CHIRALPAK? IA分离实例---中性样品-- CHIRALPAK? IA分离实例---碱性样品--- CHIRALPAK? IA分离实例---酸性样品--- CHIRALPAK? IB分离实例---中性样品-- CHIRALPAK? IB分离实例---碱性样品-- CHIRALPAK? IB分离实例---酸性样品-- 内容提纲 1. 手性HPLC分析条件的建立和优化 1-1 正相色谱 2-2 反相色谱 2. 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的注意事项 4种主要的正相柱和反相柱 分析条件优化流程图 (1) 添加物在分离中的作用 添加物的种类和用量 分析条件优化流程图 (2) 分析条件优化流程图 （3） 筛选结果 分析条件优化流程图 （4-A） 醇浓度的影响 分析条件优化流程图 （4-B） 温度的影响 分析条件优化流程图 （4-C） 醇种类的影响 正相柱分析条件优化的总结 根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物 调整正己烷/醇的比例，从而选择适当的保留时间 其它优化方法 流动相的醇浓度 降低醇的浓度能改善分离度，但会延长分析时间 色谱柱温度 降低柱温能增加α值，但会使峰形变宽 流动相中醇的种类 改换醇的种类(IPA?EtOH)，有时会使选择性发生一些变化 内容提纲 1. 手性色谱柱分析条件的建立和优化 2-1 正相色谱 2-2 反相色谱 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的有关注意事项 RH系列（反相用）的规格 根据样品性质选择流动相 反相流动相的pH值对分离度的影响(AS-RH) 有机溶剂种类对分离的影响 反相柱分析条件优化的总结 根据样品性质选择流动相 ※中性，酸性样品对4种反相柱的流动相是一致的。 但是，碱性样品对OD-RH、OJ-RH的流动相和AD-RH、AS-RH的流动相是不同的。 探索适当的保留时间和流动相组成 其它优化条件 水溶液和有机溶液比例 多数情况下降低有机溶液的浓度能改善分离，但会延长分析时间。　　 色谱柱温度 降低柱温能增加α值，但会使峰形变宽。 有机溶剂的种类 有机溶剂的种类不同，其洗脱强度也不同。有时其分离效果也发生一些变化 内容提纲 1. 手性色谱柱分析条件的建立和优化 2-1 正相色谱 2-2 反相色谱 2. 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的注意事项 手性色谱柱组合筛选 为何选用AD-H,AS-H,OD-H,OJ-H这4种柱子？ 为何选用15cm长度手性色谱柱呢？ 组合筛选设备 串联旋光检测器的好处 1 串联旋光检测器的好处 2 筛选结果示例　 　　　　　　　　 信息１: 判别具有分离可能性的色谱柱 信息2: 色谱柱和洗脱顺序 信息3: 醇的种类对分离的影响 分析条件的选择 若筛选没得到理想的分析条件时 应用组合筛选设备探索分析条件总结 使用具有广普分离能力的的4种手性色谱柱 使用适合高流速的15cm的手性色谱柱 组合应用2种醇，考察其分离情况 和旋光检测器并用，可一次性获得更多的判断信息 内容提纲 1. 手性HPLC分析条件的建立和优化 2-1 正相色谱 2-2 反相色谱 2. 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的注意事项 大赛璐（中国）手性技术服务中心 大赛璐（中国）手性技术服务中心 大赛璐（中国）手性技术服务中心 大赛璐（中国）手性技术服务中心 hi 将手性柱接入液相色谱仪之前 1.用异丙醇将HPLC所有管路彻底清洗。 2.用流动相将HPLC所有管路彻底清洗。 所有溶剂入口 泵 泵与进样阀之间 定量环 进样阀清洗液 进样阀与柱子之间 柱子与检测器之间 检测器 使用前彻底清洗管路 流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞