第十章 转基因技0226.pptVIP

第十章　基因转移技术 Chapter 10 Gene transfer 基因转移 借助基因工程技术将确定的外因基因通过生殖细胞或早期胚胎导入动物体的染色体上。 转基因动物 转基因鱼的构建 外源基因的结构 　外源基因和启动子是基因转移成功的主要因素。 获得目的基因 基因克隆 受体鱼（受精卵）的获得 注射基因 注射后鱼卵的处理（保留对照组、检测嵌合体） 转基因鱼的检测　 注射外源基因受体鱼的筛选 外源基因整合的检测 外源基因转录的检测 外源基因表达产物的检测 外源基因导入鱼卵的方法 显微注射法 　外源基因转入受体卵最常用的方法。 电穿孔法 精子载体法 基因枪法 转基因鱼研究现状 鲤鱼 Cyprinus carpio 金鱼 Carassius auratus auratus 牙鲆 Paralichthys olivaceus 对虾 Fenneropenaeus chinensis 转基因鲤鱼 1984年朱作言院士建立了世界上第一个转基因鱼模型，我国转基因鱼研究处于领先水平。 我国科学家分别将人、牛、羊、草鱼的生长激素基因转入鱼体内，培育出可以快速生长的转基因鲤鱼。 转基因鲤鱼的商品化生产日前正在进行安全性评估，如果获得批准，我国将成为世界上第一个商品化生产转基因动物的国家。 转基因鱼 “吉鲤” 中科院水生生物研究所鱼类转基因工程组的科学家们，在朱作言院士的领导下，将草鱼的生长激素基因注入鲤鱼的受精卵，培育出一种带有草鱼生长激素基因的转基因鲤鱼F1代和另一种具有草鱼生长激素基因的转基因三倍体鲤鱼“吉鲤”。 克隆草鱼生长激素基因和鲤鱼β肌动蛋白基因成为重组“全鱼”生长激素基因。 快速生长转基因黄河鲤子一代120天重达2.7公斤，是同样养殖条件下普通黄河鲤 最大个体的2.4倍。规模养殖142天平均体重达648克，较普通黄河鲤提高42%，一年内可达商品规格。 饵料利用率高，养殖成本低。饵料利用率比普通黄河鲤提高11%-18%，养殖经济效益可提高52%-126%。 品质改善，肌肉水分少于普通鲤鱼，蛋白质含量提高，脂肪含量下降。 超级鲤 转基因虾 转基因荧光斑马鱼 新加坡国立大学将从水母中分离的绿色荧光蛋白基因和从海葵分离的红色荧光蛋白基因转移到斑马鱼的受精卵中，获得了能稳定遗传的发荧光的斑马鱼，具有很高的观赏价值。目前这种转基因观赏鱼已获准在美国销售，也是唯一成功商品化的转基因鱼。 转基因唐鱼 珠江水产研究所科研人员成功将红色荧光蛋白基因转入唐鱼，使唐鱼的身体由原来的暗绿色变成红色，具有很好的观赏性。目前转基因鱼已培育到第三代，筛选到可稳定遗传的新品系。 主要经济种转基因育种及其安全性研究 针对我国大部分主要养殖品种均为野生品种或国外引进品种，未经过选育改良，不同程度地存在种质退化现象的问题，对养殖品种进行转基因改良选育与安全性评估。 养殖品种重要经济性状功能基因的克隆和功能分析；可稳定遗传转基因鱼品系的构建；转基因鱼品系的经济性能研究；转基因鱼和贝的安全性研究等。获得一批与生长、抗病等经济性状密切相关的鱼类和贝功能基因克隆；构建1-3个转基因鱼品系，其经济性状（生长、抗病等）与野生型有明显提高（提高30%以上）；获得转基因鱼的遗传稳定性、生物学、繁殖能力、抗逆性和食品安全性等数据，对转基因鱼的安全性作出评估。 重要基因的克隆与功能验证 对已克隆到的并可以在国内同行共用的抗菌肽基因、肌肉生长调控基因(Myostatin和Follistatin)、H1启动子、肌肉球蛋白启动子、肌肉和皮肤组织特异表达启动子、IGF等基因在细胞和模式生物体内进行功能检测，在不同养殖鱼类中进行功能验证。针对饲料转化、抗病、生长等经济性状及其调控网络进行研究，挖掘关键基因及其调控因子，用于转基因鱼新品种培育。 主养鱼类的转基因新品种培育及其安全性研究 通过显微注射方法将目的基因（siRNAs\GH\ IGF\转铁蛋白\ Follistatin\抗菌肽等）导入鲤鱼、草鱼、牙鲆等主要养殖鱼类，获得具有目标性状的转基因鱼；经生长对比实验、攻毒实验等技术结合基因检测方法筛选出生长快、抗病强具有外源基因的个体，按鱼类家系选育与群体选育等育种技术建立转基因鱼核心群体，进一步建立转基因鱼品系。开展转基因鱼产业化前期研究，重点是转基因鲤品种（系）的建立，食用安全与生态安全评价，繁殖群体的建立，获得生产证书。 转基因观赏鱼培育及其安全性研究 采用显微注射方法将荧光蛋白、生长激素等目的基因导入唐鱼等小型观赏鱼类，通过表型与基因型检测筛选具有目标性状的转基因观赏鱼，建立转基因观赏鱼新品系。对已获得稳定遗传的转红色荧光蛋白基因唐鱼开展生物安全性研究，从外源基因遗传稳定性、生物学特性、繁殖能力、抗逆性以及与野生型唐鱼