病理组织常用固定液的配制.docVIP

病理组织常用固定液的配制（免疫组化） 一、常规固定液的配制 （1） 10%甲醛液 浓甲醛?10ml 蒸馏水?90ml (2 ) 缓冲中性甲醛液浓甲醛 10mlPBS缓冲液（Ph7.2） 90ml? (3 ) 10%中性甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml碳酸钙 加至饱和 ? (4 ) Bouin氏固定液 苦味酸饱和水溶液75 ml 甲醛2 ml 冰醋酸5 ml 该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用，而甲醛对组织有收缩作用，两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用，使组织固定达到优良的固定水平。 ? （5）醛糖钙固定液 甲醛100ml 蔗糖300ml 乙酸钙20g 蒸镏水90ml 先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。 ? 当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对lgA ，lgM，J链，K链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗原。固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，以便破坏醛键重新暴露抗原。 ? （6）Zenker氏固定液： 重铬酸钾　? 25g 升汞?　　　50g 蒸馏水　? 1000ml 冰醋酸　　 50ml 先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中，如暴露于空气中，该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深，导致失效。临用时，取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。 应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着。应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。 ? （7）Helly氏液 重铬酸钾?　25g 升汞?　　　50g 蒸馏水　?1000ml 甲醛?　　　50ml 临用时加入甲醛，因其加入后于24小时后可发生沉淀而失效，因用时应特别注意。 该液是白细胞颗粒的优良固定剂，因此凡为白细胞或造血器官如骨髓，脾脏及患先天性梅毒之肝脏等，可用此液固定。 此液原配方要求加入硫酸钠，但据我们经验认为，硫酸钠在液中对组织无任何作用，故省去。 ? 二、冷冻切片固定液(1) 乙醚酒精液无水乙醚 1份95%酒精 1份 (2) 酒精—冰醋酸液?95%酒精 100ml冰醋酸 3~5滴三、细胞学涂片固定液的配制(1) 酒精—冰醋酸液95%酒精 97ml冰醋酸 3ml (2) 乙醚--酒精液95%酒精 50ml乙醚 50ml冰醋酸 1ml (3) Carney`s液无水酒精 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml