去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法.docVIP

PAGE PAGE 31 附件5： 化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的 检测方法 （征求意见稿） 1 适用范围 本方法规定了化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的高效液相色谱/荧光检测器的定量测定方法和液相色谱/串联质谱的定性确证方法。 本方法适用于膏霜类、凝胶类和水剂类化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的测定。 本方法中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检出限为0.02mg/L，定量下限为0.05mg/L；取1g样品时的检出浓度为0.2?g/g，最低定量浓度为0.5?g/g。 2 方法提要 化妆品试样经盐酸水溶液提取，正己烷除脂，低温高速离心后，采用高效液相色谱/荧光检测器定量测定，外标法定量，液相色谱/串联质谱仪定性确证。 3 试剂 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为分析实验室用一级水。 3.1 乙腈，色谱纯。 3.2 甲酸，色谱纯。 3.3 正己烷。 3.4 磷酸。 3.5 盐酸。 3.6 磷酸二氢钾。 3.7 氯化钠。 3.8 0.1mol/L盐酸水溶液。 3.9 饱和氯化钠水溶液。 3.10 0.05mol/L磷酸盐缓冲液：称取6.8g磷酸二氢钾（3.6），加900mL水完全溶解后，用磷酸（3.4）调节pH至3.0，用水定容至1L，过滤后备用。 3.11 标准溶液 3.11.1 肾上腺素（Epinephrine，C9H13NO3，CAS：51-43-4），去甲肾上腺素（Norepinephrine，C8H11NO3，CAS：51-41-2），异丙肾上腺素（Isoproterenol，C11H17NO3，CAS：7683-59-2） 3.11.2 标准储备溶液（?＝1000mg/L）：称取肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素0.05g（精确到0.0001g）于小烧杯中，分别用0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）超声溶解后转移至50mL容量瓶中，0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）定容至刻度，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液， 3.11.3 混合标准储备溶液（?＝10mg/L）：分别量取1.00mL肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素标准储备溶液（3.11.2）至100mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）定容，配制成10mg/L的混合标准储备溶液， 3.11.4 系列浓度标准工作溶液：用0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）稀释混合标准储备溶液，精密配制质量浓度为0.05mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的系列浓度标准工作溶液。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。 4.2 液相色谱/串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。 4.3 分析天平，感量0.001g、0.0001g。 4.4 离心机，转速不低于12000r/min。 4.5 超声波清洗器。 4.6 涡旋混合器。 4.7 pH计，测量精度±0.02。 5 测定步骤 5.1 试样的制备 称取化妆品试样1g（精确至0.001g）于25mL具塞比色管中，加入饱和氯化钠水溶液（3.9）2mL，涡旋1min后加入0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）定容至10.0mL，剧烈振荡，涡旋1min，加入正己烷（3.3）4mL，涡旋1min，超声10min，转移至离心管中，12000r/min 4℃离心10min，取水层经0.45?m微孔滤膜过滤，滤液作为待测液备用。 5.2 测定 5.2.1 液相色谱参考条件 色谱柱：SCX柱，250mm×4.6mm（i.d.），5?m，或性能相当者； 流动相：乙腈+0.05mol/L磷酸盐缓冲液（3.10）=（5+95）； 流速：1.0mL/min； 进样量：50?L； 荧光检测器激发波长：280nm，发射波长：321nm。 5.2.2 标准工作曲线的制备 在设定色谱条件下，分别取系列浓度标准工作溶液（3.11.4），按浓度从低到高依次经高效液相色谱仪测定，荧光检测器检测，以标准工作溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。 5.2.3 色谱分析 采用外标标准曲线法定量测定。使用试样（5.1）分别进样，以保留时间定性，获得目标峰面积。根据标准工作曲线计算被测试样中的含量，待测物的响应值均应在线性范围内。采用液相色谱/串联质谱法对阳性样品进行确认。 5.3 阳性结果确证 测定过程中若有阳性结果，可采用液相色谱/串联质谱法进一步确证。 5.3 色谱柱：C18色谱柱，150mm×2.1mm（i.d.），3.5?m，或性能相当者； 流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液=（2+98）； 流速：0.2mL/min； 进样量：20?