酶联免疫吸附试验室内质控的几个问题.doc

酶联免疫吸附试验室内质控的几个问题 　 临床实验室质量管理的第一要素是选择和执行适当的室内质量控制(internal quality control,IQC)程序，例如依据测定项目的质量要求和方法特点选择统计学标准、控制规则和质控品的数目，并严格执行IQC程序以提高IQC的质量。室内质控方法很多，但酶联免疫吸附测定(ELISA)中仍主要采用Levey-Jennings质控图。笔者长期从事免疫学检验质量管理工作。发现医院、血站检验科在实际工作中存在一些比较普遍的问题或疑问。根据自身实践经验，结合相关专著，简要介绍如下，供实验室参考。 1.质控品准准备 1.1 质控品浓度 以需要质控的点设值进行质控，般在Cut-of值(即CO值，是由试剂盒提供的公式计算出的阴、阳性判断标准)附近选点。建议选点方法。选择S/CO值减去精密度测定中得到的3倍批间CV与S/CO值的乘积(意即3倍s)仍大于1的质控血清作为判断实验室重复性的室内质控点。 1.2 购买质控品建议用户购买质控品进行室内质量控制，这样的质控品的稳定性更有保证。主要项目在卫生部临床检验中心都有长期供应(北京东单大华路1号北京医院内卫生部临床检验中心免疫质量控制室，邮编：1O0730) 1.3 自制质控品的制备方法 (1)收集阳性血清(无明显溶血、黄疽、脂血或污染血清)，累积到一定数量(够本室使用6月以上)；(2)混匀，经56℃ lO小时灭活，(3)离心或过滤，去除纤维沉淀物(4)用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀释．使S/CO值达到2～4之间(5)与定值参考品进行对比，求测定值(6)将质控血清按0.2～O.5毫升/支分装、封口、贴签，置-2O℃ 2.如何正确应用“即刻法”进行质控不能随意使用“即刻法”，以下情况下可使用：(1)实验室不是每天进行ELISA项目的检验，而ELISA试剂盒效期短．用一批号试剂盒连续常规检测2O次以获得RCV数据难度较大。采用“即刻法”质控统计方法，只需连续测3次，即可对第3次检验结果进行质控；(2)在某一检测项目开始准备开展Levey-Jennings室内质控，尚未完成RCV测定时使用，其目的是尽早启动室内质控，在开展lI缶床实验的同时进行RCV测定，以便在获取足够数据后转入Levey-Jennings室内质控。由于数据量小，质控规则单一，“即刻法”质控方法可靠性相对较差。在使用该质控方法时，务必加强实验全程监控以保证质量，并在获取足够数据后及时转入Levey-Jennings室内质控。实验室需要更换质控品批号时，应提前开始下一批号质控品RCV靶值和标准差的测定，尽量避免使用“即刻法”质控方法。 3.质控规则的选择 一般以x靶±2s为警告限，以x靶士3s为失控限(这是公认的判断实验结果是否失控的原则)，获得“常规实验室质量控制图”空图。每次(或每天)随患者样本测定的质控物值，标记在质控图上。分析质控图中每天检测质控标本的结果分布，判断当天检测的结果数值是否在控制限之内。各实验室选择失控限时，应根据本室条件进行选定。失控限定得太宽，几乎不必担心有失控可能，这样常将失控结果误判为合格，使质控失去意义；相反，失控限定得太严，使太多的结果甚至合格的结果判为失控，这也使质控失去意义。依据本室条件，设定失控限，是室内质控重要的环节。Westgard多规则质控分析法：在质控图中，单纯依据质控点超出2s为警告，超出3s为失控，在临床检验中已显不够。Westgard将常用的判断失控的规则总结出许多条规则，选择质控规则时必须兼顾室内质控对失控的检出能力及误判失控的可能性。在免疫学检验质控中，建议实验室选择使用以下 几种质控规则：(1)13s:1个质控点落在士3s之外；(2)R4s：连续2个质控点相差超出4s范围；(3)41s:连续4个质控点落在同一侧士1s之外；(4)7x靶：连续7个质控点落在均值之一侧；(5)7t：连续7个质控点呈连续上升或下降，或周期性波动变化。质控规则还有很多，各实验室可依据自己的实际情况选择质控规则。 4．更换试剂批号的处理方式 由于ELIsA试剂的效期相对较短，而在冷冻条件下，免疫质控血清效期相对较长，一个批号的质控血清往往要几个批号的试剂才会用完，因此实验中常会遇到更换试剂批号后如何处理质控图的问题。更换不同厂家的试剂必须重新计算RCV(最好在更换前完成RCV的测定，以免中断室内质控)。更换相同厂家不同批号的试剂，使用质控血清浓度值上下相邻的系列质控血清验证新批号试剂S/CO值的一致性。推荐对不同批号试剂间系列血清结果回归方程进行比较，以获得两批试剂间的换算因子，可以在同一质控图上继续描点。当换算因子为1时，使用实测S/CO值作图。从理论上说，两个回归方程经统计学检验差异无统计学意义时，可以延续使用上批号质控图。 5.分批质控方法 进行大