第四章 荧光分析法.pptVIP

自旋配对指分子中同一轨道所占据的两个电子必须具有相反的自旋方向。 * 自旋配对指分子中同一轨道所占据的两个电子必须具有相反的自旋方向。 * 电子在能级间的跃迁是以概率论的。跃迁禁阻是指:跃迁的概率极小,宏观的认为电子不发生这种跃迁即跃迁禁阻。 * 如测Ca离子，用340nm和380nm双波长检测，340nm的荧光强度是1.33，而380nm的荧光强度是2.66，那么如果以340nm的读数为1，380nm的相对读数就是2.66/1.33＝2。 * * 酪氨酸和色氨酸的激发光谱很相似，发射光谱重叠严重，以Δλ＜15nm时的同步荧光光谱只显示酪氨酸的光谱特征，以Δλ＞60nm时的同步荧光光谱只显示色氨酸的光谱特征，从而分别测定。 * 酪氨酸和色氨酸的激发光谱很相似，发射光谱重叠严重，以Δλ＜15nm时的同步荧光光谱只显示酪氨酸的光谱特征，以Δλ＞60nm时的同步荧光光谱只显示色氨酸的光谱特征，从而分别测定。 * 酪氨酸和色氨酸的激发光谱很相似，发射光谱重叠严重，以Δλ＜15nm时的同步荧光光谱只显示酪氨酸的光谱特征，以Δλ＞60nm时的同步荧光光谱只显示色氨酸的光谱特征，从而分别测定。 * 酪氨酸和色氨酸的激发光谱很相似，发射光谱重叠严重，以Δλ＜15nm时的同步荧光光谱只显示酪氨酸的光谱特征，以Δλ＞60nm时的同步荧光光谱只显示色氨酸的光谱特征，从而分别测定。 * 酪氨酸和色氨酸的激发光谱很相似，发射光谱重叠严重，以Δλ＜15nm时的同步荧光光谱只显示酪氨酸的光谱特征，以Δλ＞60nm时的同步荧光光谱只显示色氨酸的光谱特征，从而分别测定。 * 时间分辨荧光分析法（Time resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10^(-12)g/ml[1]? ，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。由于其高灵敏度，在临床上得到了广泛的应用，逐渐代替了放射免疫分析。解决杂散光影响的最好方法当然是测量时没有激发光的存在。但普通的荧光标志物荧光寿命非常短，激发光消失，荧光也消失。不过有非常少的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）的荧光寿命较长，可达1～2ms，能够满足测量要求，因此而产生了时间分辨荧光分析法，即使用长效荧光标记物，在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法。 　 平时常用的稀土金属主要是Eu(铕）和Tb(铽），Eu荧光寿命1ms,在水中不稳定，但加入增强剂后可以克服；Tb荧光寿命1.6ms，水中稳定，但其荧光波长短、散射严重、能量大易使组分分解，因此从测量方法学上看Tb很好，但不适合用于生物分析，故Eu最为常用。 标记离子的荧光激发光波长范围较宽，发射光谱峰范围窄，是类线光谱，这有利于降低本底荧光强度，提高分辨率。激发光和发射光之间有一个较大的Stokes位移，有利于排除特异荧光的干扰，增强测量的特异性。每一秒钟检测样品1000次，结果取平均值，有利于提高检测的准确性。 * 时间分辨荧光分析法（Time resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10^(-12)g/ml[1]? ，较放射免疫分析（RIA）高出3个数量级。它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。由于其高灵敏度，在临床上得到了广泛的应用，逐渐代替了放射免疫分析。解决杂散光影响的最好方法当然是测量时没有激发光的存在。但普通的荧光标志物荧光寿命非常短，激发光消失，荧光也消失。不过有非常少的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）的荧光寿命较长，可达1～2ms，能够满足测量要求，因此而产生了时间分辨荧光分析法，即使用长效荧光标记物，在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法。 　 平时常用的稀土金属主要是Eu(铕）和Tb(铽），Eu荧光寿命1ms,在水中不稳定，但加入增强剂后可以克服；Tb荧光寿命1.6ms，水中稳定，但其荧光波长短、散射严重、能量大易使组分分解，因此从测量方法学上看Tb很好，但不适合用于生物分析，故Eu最为常用。 标记离子的荧光激发光波长范围较宽，发射光谱峰范围窄，是类线光谱，这有利于降低本底荧光强度，提高分辨率。激发光和发射光之间有一个较大的Stokes位移，有利于排除特异荧光的干扰，增强测量的特异性。每一秒钟检测样品1000次，结果取平均值，有利于提高检测