第6章-放射性核素生物示踪技术.pptVIP

6.3.2示踪剂的引入 示踪剂的形态有气态、液态和固态。示踪剂引入生物体的途径是多样的。根据试验的目的要求、实验室条件、示踪剂的性质等选用合适的引入方法是示踪研究的一个重要环节。引入方法的好坏直接关系试验的成败。 常用的示踪剂引入方法有下列几种。 1.根部引入植物体的方法 示踪剂通过植物根系的吸收引入植物体的方法是示踪试验中最常见的一种方法。这种引入方法比较简单，根部引入又可分成如下三种方法。 （1）埋入法。埋入法为将示踪肥料或制剂按试验要求在栽种作物前埋入一定深度的土层中。 （2）注入法。注入法是在植物生长过程中，将示踪剂溶液用特殊的注射器注入士壤中. （3）盆栽培养试验通常根部引入示踪剂。如土培，示踪剂可与供试土壤混合均匀装盆。 2.根外引入植物体的方法 示踪剂通过根系以外的部分引入的方法随作物种类、试验要求与示踪剂形态而不同。 （1）浸渍法是将作物种子在播种前放入含示踪剂的溶液内浸泡，使放射性制剂吸入种子中，以观察其在幼苗中的分布动态。 （2）喷雾法是用小型喷雾器将示踪剂喷在叶面、茎秆或果实上。喷雾法的主要优点是方便。因此，在标记量很大而精确度要求又不以单株为标准时，采用喷雾法具有一定优势。 （3）涂抹法是用毛笔等将溶液定量地涂在叶片上。 （4）注射法是指经过植株切口或其他部位，将示踪剂引入植物体内的方法。根据注射部位的不同、有叶脉注射、叶尖注射、叶柄注射、茎秆和茎基部注射等。 （5）气体示踪剂引入植物体除了需要密闭系统外，还要有气体发生器、气体循环系统等。在环境保护研究、大气污染物对植物的影响试验中，示踪化合物常通过气体引入。 （6）光合作用引入法是利用光合作用，将放射性14C引入植物体的方法，既是研究光合作用机理的基本方法，也是研究植物碳素营养、物质代谢、养分吸收、分布、物质积累等最常用的方法。 3.示踪剂引入动物体的方法 示踪剂引入动物体的方法也是多种多样的，其中主要有注射法，包括皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射等；口服法，通过食物、饮水等途径引入体内；灌胃法通过食物或药液直接灌入胃中；涂抹法 ,在动物体的一定部位，将毛除去让皮肤吸收渗透进入机体内；吸入法，主要是将气体示踪剂由呼吸过程引入体内。在动物体引入中无论何种方法，都要注意到动物的活动状态的污染。 6.3.3样品的采集、制备和测量 核素示踪研究是通过示踪剂在实验系统中的分布、转化及存在量来描述事物发展的过程、物质变化规律和归宿的,因此,样品的采集、制备和测量等环节对于研究结果具有十分重要的影响。 样品的采集 （1）植物样品的采集。用根部引入法进行标记的植株，要注意采集部位之间的区分。采集地下部分时，则要将地下部分用水或其他溶剂冲洗干净，冲洗时植株不能倒置。由根外引入的放射性，当采集地下部分或引入部位以外的组织时，要注意标记叶片的采集和处理。根据试验要求，有的标记叶片需要严格清洗，将末被吸收的残余放射性冲洗掉。 （2）土壤样品的采集。分层取样时要严防标记层对样品的污染。 （3）气体样品的采集。气体样品主要指14CO2，也包括一些挥发性物质，如光呼吸测定、农药代谢降解产物等都需要收集放射气体。气体样品收集的关键是吸收系统的准备。 （4）动物样品的采集。动物样品有血液、尿、粪、各种内脏器官、组织、肌肉、骨骼等。要注意排泄物污染，如采集局部组织时注意体液对组织的污染。 2.样品的制备 样品制备的目的是把采集到的样品转化为适于测量的形态。它包括清理、称重、提取、转化等加工过程。 一个完善的制样方法，应满足如下几点基本要求：(1)样品测量结果要有良好的重现性。(2)制备手续简便易行。 (3)要求具有一个适当的计数率。 (4)要容易保存，便于复查。 植物干样的制备。将粉碎好的植物样品，称取一定重量置样品盘内，铺匀后即可供测量。称样前样品应烘至恒重。样品称量应按实验室内所用样品盘的大小和测样厚度的要求而定。样品厚度根据射线在样品中自吸收的程度来确定。一般希望制成的样品无自吸收效应。 干灰化样品的制备。灰化是一种样品浓缩法,主要用于生物组织中金属和微量元素的制样测量。生物样品的灰化有干灰化和湿灰化两种。干灰化方法适于那些不会因高温而损失的元素(如32P、45Ca、59Fe、65Zn等)。当生物体中示踪剂含量较低时，可以把较多的样品经灰化而达到浓集，使计数率提高。有些动物组织不易制成其他样品时，可以制成灰化样品，如骨骼、皮毛等。为了防止干样和灰化样品的飞散，在铺平后可以加薄膜覆盖。 消化样品的制备。凡不宜高温灰化的元素所标记的生物样品，可以采用消化方法，又称湿灰化方法制备。消化是借酸、碱或其他因素使难溶物质水解成为较易溶解的分子，便于进行均相或非均相测量。消化所得到的清澈消化液定容稀释后吸取一定量置于测碟内，用红外灯或真空干燥后即可测量。在液体闪