第七节双向电泳.pptVIP

第七节 双向电泳 定义：将样品进行电泳后，为了不同的目的在它的垂直方向再进行一次电泳的方法。 双向电泳的种类： 第一向等电聚焦，第二向SDS电泳 第一向SDS电泳，第二向等电聚焦。 常用的双向电泳为第一向等电聚焦，第二向SDS电泳。 第一向：等电聚焦 载体两性电解质PH梯度 固相PH梯度（IPG）： 固相pH梯度 为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯酰胺衍生物系列，其中R包含羧基或叔氨基团，它们构成了分布在pH3~10不同值的缓冲体系。 不产生阴极漂移、PH梯度稳定、分辨率高、重复性好。 第二向：SDS同普通SDS类似。 一般在垂直电泳系统中无需浓缩胶，因为在IPG胶条中蛋白质区域已得到浓缩，可以认为非限制性IEF胶（低浓度丙烯酰胺胶）充当了浓缩胶。 双向电泳在在制药工程中的应用 药物及药物靶点的识别 疾病标记蛋白的识别 药物毒理学研究 药物合成过程中相关酶系的研究 蛋白质间的相互作用 IPG胶条的蛋白质大约载样量 IPG Strip length Analytical Load (silver staining) Preparative Load (Coom staining) 7cm 10~100 ? g /125 ? l 200~500ug/125 ? l 11cm 50~200 ? g /185 ? l 250~1000ug/185