实验三、细胞内过氧化物酶的显示——联苯胺反应.ppt

实验6  细胞内过氧化物酶的显示 联苯胺反应 【实验目的】 掌握联苯胺反应法显示细胞内过氧化物酶的原理和方法。 【实验原理】 细胞内的过氧化物酶可以将联苯胺氧化成蓝色或者棕色产物，蓝色为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙，通过产物颜色间接显示出细胞内过氧化物酶的分布。 【实验仪器、材料和试剂】 光学显微镜；小白鼠、剪刀、镊子、载玻片、牙签、吸管。 0.5% CuSO4（0.5克CuSO4溶于100ml蒸馏水中）、联苯胺混合液（0.1克联苯胺在研钵中加少许蒸馏水研成细浆，加入100ml蒸馏水，过滤后加入2滴3%双氧水，放棕色瓶中备用）、1%番红[1克番红O（Safranine O）染料溶于100ml蒸馏水中]。 【实验步骤】 用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出股骨； 剪断或者折断股骨，用牙签挑取骨髓，放置于载玻片上制成涂片，晾干； 将涂片上滴加几滴0.5% CuSO4，固定1分钟； 倾去CuSO4溶液，滴加0.1%联苯胺混合液，染色6分钟； 用自来水或蒸馏水冲洗，滴加1%番红染液，染色1分钟； 用自来水或者蒸馏水冲洗，空气中晾干，显微镜下观察。 颈椎脱臼法处死小鼠 【观察与结果】 骨髓细胞内可以见到蓝色或者棕色的颗粒，即过氧化物酶所在的部位。