氨基酸全面分析.ppt

* ?两步法是先将羧基用短碳链脂肪醇酯化， 然后再用各种酸酐将N-（O、S）基团乙酰 化。 ?一步法是用烃基氯甲酰酯在水、醇类和吡 啶介质中将氨基酸一步衍生化生成烃基碳 氧酰烃基酯。 衍生化方法 * ?毛细管电泳具有微量、灵敏和柱效高的 特点，适合于氨基酸手性分离和复杂样 品中的氨基酸分析。 ?用于氨基酸分析的毛细管电泳主要采用 两种分离模式：毛细管区带电泳和胶束电动毛细管电泳。 ?检测方式主要有紫外法和荧光法。 毛细管电泳法 * ?毛细管电泳法可以进行柱前、柱内和柱后衍生化。 ?柱内衍生化要求反应速度快，一般采用串联或 “夹心饼”两种形式，具有试剂和样品用量少的 优点。 ?柱后衍生化可以避免柱前或柱内衍生化时其他 化合物对衍生反应的干扰，缺点是柱后反应装 置体积大，会引起色谱峰变宽而降低分离效果。 毛细管电泳法 * 氨基酸选择性反应的分析方法 1、显色分析法 2、荧光法 3、微生物方法 4、酶分析法 * 显色分析法 ?有几种显色试剂只有当干扰物预先除去后才有定量分析的价值。 ?在有些情况下可以通过改变试剂的组成或反应条件以便进行某一种氨基酸的选择性测定。 * 荧光法 ?色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等在紫外光照 射下会产生荧光，其它氨基酸与某些有机 试剂反应之后其产物才会产生荧光。 ?相对于显色法，荧光分析法的选择性和灵 敏度要好。 * 微生物方法 ?微生物方法用于氨基酸分析的原理是：有些微生物的生长和复制需要特定氨基酸的存在。 ?在有限量的氨基酸存在下微生物的生长将受到限制。利用浊度分析法或测定乳酸生成量的增加可对微生物的生长进行评价。 ?微生物方法适合于各种生物样品，可用于大量样品的批量分析，而且分析耗费低。 * 酶分析法 ?一种酶对氨基酸某一种异构体的特异性可 以用于D或L型氨基酸的测定。在这一应用 中氨基酸氧化酶非常有用。 * 存在的问题及发展趋势 ?氨基酸分析中最主要的问题是来自环境的氨基酸的干扰； ?微量氨基酸的分析仍然是一个富有挑战性的课题； ?氨基酸构型分析及手性拆分也是国内外研究的热点。 * 研究应用-蒸发光散射法 * 研究应用-测定血浆中氨基酸 * 研究应用-口服水解蛋白成分分析 * 研究应用-羊肉氨基酸成分分析 * 研究应用-鱼肉中氨基酸含量分析 * 研究应用-慢性肝病研究 * * * 第二章 氨基酸分析 * 氨基酸分析在蛋白质化学和生物技术研究、临床诊断和细胞生理学研究、营养学与卫生保健、培育农作物优良品种、食品、制药等领域具有非常重要的意义。 氨基酸分析 * 氨基酸的基本结构及性质 氨基酸是分子中含有氨基和羧基的一类化合物。 组成蛋白质的氨基酸只有二十种。其中有八种为人体必需氨基酸。 人体必需的氨基酸：人体内不能合成，只有靠食物供给的氨基酸。 各种蛋白质含氨基酸的种类和数量都各不相同。 * 氨基酸的分类 1、根据氨基酸的酸碱性 酸性氨基酸 碱性氨基酸 中性氨基酸 氨基酸 * 酸性氨基酸 二个羧基 一个氨基 天冬氨酸 谷氨酸 碱性氨基酸 一个羧基 二个或二个以上氨基 赖氨酸 精氨酸 组氨酸 中性氨基酸 一个羧基 一个氨基 实际水溶液呈弱酸性： 电离能力 COOH NH2 * 2、根据氨基酸的化学特性 疏水性：Ala（丙氨酸） Val（缬氨酸） Leu （亮氨酸）Ile（异亮氨酸） Phe（苯丙氨酸） Pro（脯氨酸） Met（蛋氨酸） 带电：Arg （精氨酸）Lys（赖氨酸） Asp （天冬氨酸）Glu （谷氨酸）(His)组氨酸 极性： Tyr（酪氨酸） Trp（色氨酸）Ser（丝氨酸）Cys（半胱氨酸）Thr（苏氨酸）Asn（天冬酰胺）Gln （谷氨酰胺）His（组氨酸）特殊：Gly (Pro)甘氨酸 脯氨酸 氨基酸的分类 * 带电氨基酸 * 极性氨基酸 * 氨基酸的立体化学 由蛋白质水解的氨基酸都为α-氨基酸，除甘氨酸外，所有α- C都为手性碳原子。 天然的氨基酸均为L-氨基酸 * 氨基酸的理化性质 1. 溶解度 2. 熔点:高 3. 旋光性有旋光性 4. 味感：D-氨基酸大多带甜味，L-氨基酸有苦、甜、鲜、酸等四种不同味感。 1. 两性性质：氨基酸分子中含有氨基及羧基，使其既能象酸又能象碱一样解离； 2. 与甲醛作用： 3. 与2,4-二硝基氟苯作用： 4. 与茚三酮的作用： 5. 与异硫酸苯酯的作用： 6. 与荧光胺的作用： 7. 与5,5‘-双硫基-双(硝基苯甲酸)反应 * 等电点 概念：将氨基酸水溶液的酸碱度加以适当地调节，使氨基酸的酸性电离程度与碱性电