第八章目的基因制备.pptVIP

目的基因: 为使优良性状聚集于同一生物体，在生物群体中分离其编码蛋白（酶）的基因，创造出有价值的新物种。 目的基因的制备: 构建基因组文库 构建cDNA基因文库 利用聚合酶链式反应技术 基因的化学合成 基因文库 基因组文库构建 基因组文库必须符合的基本条件： 文库能够覆盖整个基因组 插入的片段比较大 文库比较稳定，且容易保存和操作 基因组文库的大小： N=ln(1-P)/ln(1-f ) N：文库必需的克隆数 P：文库中目的DNA片段的出现概率 f：插入片段大小/全基因组大小的比值 基因组文库构建的基本步骤： 大片段DNA克隆载体的准备 大分子质量的植物基因组DNA制备 大片段DNA分子的部分酶切 载体与外源片段的连接 载体的遗传转化 cDNA文库 基因组文库 包含该生物基因组DNA全部的序列 是具有生物种属特异性的。 cDNA文库: 已经过剪接、去除了内含子的cDNA。 具有组织细胞特异性 cDNA文库的构建 载体DNA片段的制备 分离细胞总RNA 以mRNA 为模板，合成cDNA 第一链 双链cDNA 的合成 mRNA纯化的方法:以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效。 原理：利用mRNA 3’末端含有