原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
原位杂交操作流程;冰冻切片的（DIG-labeled RNA probe）原位杂交操作程序
一、???????????? 切片制备
用新鲜组织制作6μm厚冰冻切片，37℃干燥1～4小时，进行下一步操作。
二、???????????? 预杂交前处理
预固定：4%PFA（in DEPC-PBS Ph7.4）RT 30～60min 4%PFA：多聚甲醛 20g
1×PBS 450ml
加热（60℃、20min）溶解
冷却后调pH至7.4
1×PBS → 500ml
PBS RT 5 min×2 10×PBS：500ml
NaCl 40g
KCl 1g
KH2PO4 1g
Na2HPO4 7.7g
DEPC水 450ml
调Ph至7.5 DEPC水加至500ml
PBS(含0.3%v/vTritonX-100) RT 15 min 临用前配制
10%TritonX-100 15ml
1×PBS → 500ml
PBS RT 5min ×2
;消化： 2μg/mlProteinase K in TE buffer 37℃ 10 min TE：
pH8.0 Tris-HCl 1M 5ml
pH8.0 EDTA 0.5M 1ml
DEPC水 →
文档评论（0）