G418筛选稳定表达细胞系经验总结.pdfVIP

G418 筛选稳定表达细胞系经验总结 我做了稳定转染，从 G418 浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其 他战友遇到的情况 , 和大家分享 . 没有总结好的地方，大家补充。 筛选之前确定 G418 浓度： 1、由于每种细胞对 G418 的敏感性不同，而且不同的厂家生产的 G418 有效成分的比重 不同，一般 1g 的粉剂中有效的 G418 含量大约为 0.722g。 2、G418 是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细 胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而 G418 对细菌和真核细胞都起作用。 neo 就是编 码 3 磷酸转移酶的基因，它表达的蛋白能够分解新霉素‘ G418。在进行转染时细胞膜受 到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上 G418 有杀菌作用，所以有人主张转转 染时不加其它抗生素。 3、汇合度 对 G418 筛选结果的影响很大，一般筛选时汇合度不宜超过 5