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输血前血型血清学检查 疑难标本的实验操作 及试剂的使用 北京市红十字血液中心 血液研究所 血型室 苗天红 输血前血型血清学检查 （输血相容性检测） 《临床输血技术规范》要求 血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血型） 抗体筛选（受血者意外抗体筛查） 交叉配血 一 ABO血型 ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+； 反定型反应强度≥ 2+。 ABO 正反定型不符的定义和范围 ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。 ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜ 4+，反定型反应强度＜2+。 正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别 ＞2+以上。 正反定型不符 ? ABO 正反定型不符 （多或少抗原、抗体） 正反定型不符 ABO 正反定型相符， 但弱反应，正定型反 应强度＜4+，反定型 反应强度＜2+。 正反定型不符 正定型为O型，反定型非O 型或Ac、Bc凝集强度差别 ＞2+以上 正反定型不符处理的程序 排除仪器设备、试剂、标 本及操作失误。 查阅、询问病历资料，设 计针对性试验。 选择试管法做正反定型。 ABO血型鉴定的特殊技术。 吸收放散试验 唾液型物质检测 毛细管离心分离自身和输入红细胞 DTT处理自身凝集红细胞 分子生物学检测（血型基因）  询问、查阅病历 试管法正反定型 血型鉴定特殊技术 观察 ↓ 假设 ↓ 验证 ↓ 解决 试管法 试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。 可以反复离心看结果。 可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、 37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集 素的干扰。 可以观察红细胞混合外观现象。 可以观察红细胞溶血现象。 试管法正反定型 ABO血型定型试剂 抗-A1 抗-A1 用于检测A亚型。 注意： 抗-A1反应阴性 A亚型 A型抗原减弱 A型新生儿与抗A1反应阴性或 弱反应 抗-H 抗-H 用于检测ABO亚型及 孟买、类孟买型。 ( A或B亚型H抗原增强，孟买、 类孟买H抗原阴性。) 注意： 血液病致A、B抗原减弱，H抗原 可能出现增强或减弱。 必须做对照试验。 抗-AB 抗-AB 用于鉴定Ax和Bx， 抗-AB与Ax、Bx抗原会产生 较强反应。 反定型 O细胞 用于确认反定型的 有效性,可以发现ABO系统 以外室温反应性抗体干扰 ABO反定型。 自身对照 用于检测是否 存在自身冷抗体干扰ABO反 定型，确认正反定型的有 效性。 A2细胞 用于A亚型的鉴定 （A亚型产生抗-A1抗体）。  注意： 反定型抗-A减弱，可能出 现与A1细胞阳性反应，与 A2细胞反应阴性。 规范的摇试管方法 试管法凝集强度判读 反应强度 红细胞凝集情况 4+ 一个结实的大凝块，背景清楚 3+ 几个大凝块，背景清楚 2+ 中等大小凝块，背景清楚 1+ 小凝块，背景较混浊 w+ 有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝 集细胞 0 没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液 pH 部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色 H 完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色 mf 混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞 试管法凝集强度 为什么要使用标准凝 集强度： 操作标准化。 实验结果有回溯性。 保证不同实验室、不同工 作人员对同一标本实验结 果的一致性。 吸收放散试验 表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、 抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。可以通过将其吸收 的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或 弱B抗原的存在。 吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。 吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B 。 将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间 每隔15分钟混匀一次。 用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。 56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。 用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。 注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。 巯基试剂消除自身凝集红细胞 巯基试剂：DTT、2-Me 巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷 自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝 集的红细胞。 用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的 0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成2-4%的悬液备用。 DTT处理自凝红细胞 RhD血型 被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝集 者为RhD阴性。 正常的RhD阳性：与IgM抗-D≥3+ 反应强度。 红细胞与IgM抗-D反应强度≦2+ D变异型 自身凝集红细胞 抗-D引起的新生儿溶血病。 血液病致D抗原减弱 直接抗人球蛋白强阳性红细胞