褪黑素对大鼠腹主动脉支架置入损伤的保护作用及机制研究.PDFVIP

学校代码： 10023 学 号： 200801038 内 部： 保密2 年 褪黑素对大鼠腹主动脉支架置入 损伤的保护作用及机制研究 专业年级： 北京协和医学院临床医学专业2008 级 姓 名： 施 焘 导 师： 刘昌伟（教授） 北京协和医学院临床学院 （北京协和医院） 血管外科 完成日期： 2016 年06 月 1 目录 1 中文摘要 3 2 英文摘要 4 3 引言 5 4 实验材料及方法 6 4.1 大鼠腹主动脉支架置入模型的建立 6 4.2 大鼠支架置入处腹主动脉HE 染色…………………………………………10 4.3 qPCR………………………………………………….…………………………11 4.4 Western blot …………………………………………………………………….13 4.5 ELISA …………………………………………………………………………..18 4.6 数据分析………………………………………………………………………..20 5 实验结果……………………………………………………………………………….2 1 5.1 支架置入处大鼠腹主动脉的病理改变………………………………………..21 5.2 大鼠血清酶联免疫吸附测定（ELISA ）检测…………………….…………..23 5.2.1 大鼠血清中ROS 浓度分析……………………………………………..23 5.2.2 大鼠血清中TNFα 浓度分析 …..24 5.3 支架置入处腹主动脉荧光定量PCR （qPCR ）检测…………………………24 5.3.1 对基因Nrf-2 及HO-1 的 RNA 水平的分析…………………………..25 5.3.2 对基因eNOS 及CD31 的RNA 水平的分析………………………….26 5.4 支架置入处腹主动脉的蛋白免疫印迹法（Western Blot ）检测…………….27 6 实验讨论……………………………………………………………………………….28 6.1 大鼠腹主动脉支架置入模型建立的有效性及注意事项……………………..28 6.2 大鼠支架置入处腹主动脉病理结果解读……………………………………..29 6.3 大鼠血清中氧化应激及炎症水平变化情况分析……………………………..30 6.4 大鼠支架置入处腹主动脉组织内特定RNA 及蛋白质表达情况分析………32 6.5 实验的不足之处………………………………………………………………..34 7 实验结论……………………………………………………………………………….34 8 参考文献 34 9 综述 35 10 致谢 45 11 独创性声明 46 2 1 摘要 本研究通过建立大鼠腹主动脉支架置入损伤模型，探究褪黑素对于支架置入后 血管内再狭窄，及手术后全身氧化应激及炎症水平上升等病理变化的保护作用，并 将其作用效果与雷帕霉素洗脱支架进行比较。另外还将初步揭示褪黑素的作用机制。 本研究随机将12 只400g 左右雄性Sprague-Dawley 大鼠分为4 组，每组3 只。 分别是空白对照组、裸支架组、裸支架+全身褪黑素用药组及雷帕霉素洗脱支架组。 空白对照组不做任何处理，裸支架组及雷帕霉素洗脱支架组中于大鼠腹主动脉中置 入相应支架。裸支架+全身褪黑素用药组中置入支架后，还需以 10mg/kg/天的剂量 为大鼠腹腔注射褪黑素3 周。3 周后麻醉大鼠并取动脉血及支架置入处血管组织等 标本，对形态学、炎症通路、氧化应激和抗炎通路的关键分子进行检测，包括腹主 动脉形态学变化、血清ROS 及TNFα