第四章-培养基灭菌与空气净化.pptVIP

第四章 培养基灭菌与空气净化;第一节 培养基灭菌的目的、要求和方法 第二节 培养基的湿热灭菌 第三节 空气净化（除菌）;第一节 培养基灭菌的目的、要求和方法 ;2.灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。;1.在发酵过程中杂菌造成的后果： 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力； 在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主； 杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难； 杂菌会降解目的产物：醋酸菌氧化乙醇 杂菌会污染最终产品：酿酒干酵母的杂菌 发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。;1）使用的培养基和设备须经灭菌； 2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； 3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； 4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； 5）使用无污染的纯粹种子。;3.培养基灭菌的目的 杀灭培养基中的所有微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。;4.培养基灭菌的要求 达到要求的无菌程度（10-3） 尽量减少营养成分的破坏。 在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。;化学法 化学药品灭菌法 物理法 射线灭菌法：紫外线或电离辐射 空气的过滤除菌 干热灭菌法 湿热灭菌法;;连;苯并芘;关于灭菌和消毒的不正确的理解是（ ） A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细 胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是相同的 C．接种环用灼烧法灭菌 D．常用灭菌的方法有加热法、过滤法、紫外 线法、化学药品法;谷氨酸棒状杆菌的培养液常采用的灭菌方法是（ ） A．高压蒸汽灭菌 B．高温灭菌 C．加入抗生素灭菌 D．酒精灭菌;防腐（antisepsis）;一、湿热灭菌的原理 每一种微生物都有一定的生长温度范围。 当微生物处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内死亡。;蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒； 蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； 蒸汽有很大的潜热； 操作方便，易管理。;湿热灭菌中的相关概念;——杀死微生物的极限温度称为致死温度。; ------利用一定温度进行加热, 90%的活菌被杀死时所需的时间(min)即为D值。又称1/10衰减时间。 ;例： 含有某种细菌的悬液，含菌数为105/mL,在100℃（212°F）的水浴温度中，活菌数降低到104/mL时所需的时间为10min,则该菌的D值即为10min。 D100 = 10min 如果加热的温度为121℃，则常写成Dr;—— 在加热致死时间曲线中，加热时间缩短90%所需升高的温度，即为Z值。; τ =(2.303/k)log(No/Ns) τ---灭菌时间（s） k---反应速度常数，与菌的种类和加热温度有关（s-1） No---灭菌开始时，污染的培养基中杂菌个数（个／mL） Ns---经过灭菌时间T后，残存活菌个数（个／mL） ;◆ 在培养基中有各种各样的微生物，不可能逐一加以考虑。一般只考虑芽孢细菌和细菌的芽孢数之和作为计算依据。;例： 有一发酵罐内装40m3培养基，在121℃温度下进行实罐灭菌。原污染程度为每mL有2×105个耐热细菌芽孢， 121℃时灭菌速度常数为1.8min－1。求灭菌失败几率为0.001时所需的灭菌时间。; 将配制好的培养基放在发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行加热灭菌的过程，也称实罐灭菌。;;发酵罐;连续灭菌的流程与设备;（3）维持罐，使料液在灭菌温度下保持5?7min。 因为：连消塔加热的时间很短，光靠这段时间的灭菌是不够的； （4）冷却管，使料液冷却到40?50 ℃后（冷水喷淋） ，输送到预先灭菌过的罐内。 ;连续灭菌过程中温度的变化(虚线) ;;四、影响培养基灭菌的主要因素;3、菌的浓度;5、泡沫 泡沫中的空气形成隔热层，使热量难以渗透进去杀死其中潜伏的微生物； 易产生泡沫的培养基在灭菌时，可加入少量消泡剂。;五、发酵罐的灭菌;六、补料液的灭菌;无菌空气的概念 发酵工业应用的“无菌空气”是指通过除菌处理使空气中含菌量降低在一个极低的百分数，从而能控制发酵污染至极小机会。 发酵对空气无菌程度的要求 一般按染菌机率为10-3。来计算，即1000次发酵周期所用的无菌空气只允许1~2次染菌。;空气中微生物的分布; 空气中