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实验二 血红蛋白及其衍生物的吸收光谱及定量测定 一、目的要求 1、掌握722型分光光度计的使用。 2、了解血红蛋白及其衍生物的吸收光谱的测定。 3、掌握血红蛋白标准曲线的绘制。 二、实验原理 血红蛋白（Hb）与O2结合生成氧合血红蛋白（HbO2），与CO结合生成一氧化碳血红蛋白（HbCO），因其血红蛋白分子结构不同，当光线分别透过各种Hb溶液时，所吸收的光波也各异，可显出特有的吸收光谱。这些吸收光谱可作为它们定性和定量分析的基础，如HbO2在可见光波长400~600nm范围内有三个特征的吸收峰，其峰值分别在415、541和576nm处，当氧合血红蛋白转为一氧化碳血红蛋白（HbCO），此时光谱发生改变，在波长419、540和569nm处出现三个特征的吸收峰，其中在500~600nm范围内三个特征的吸收峰如下图。 本实验先制备Hb及其衍生物，然后在不同波长下测其光吸收度，以吸光度（A）（又称光密度）为纵坐标，波长为横坐标绘制成吸收光谱曲线，由此可以确定它们最大的吸收波长。 三、仪器和试剂 1．仪器：试管及试管架；吸量管；滴管和 量筒；722型分光光度计；CO发生器。2．试剂： （1） 浓H2SO4； （2）甲酸； （3）蒸馏水； （4）血红蛋白溶液。 722