显色基质鲎试剂盒使用说明(终点显色法含偶氮化试剂).pdfVIP

显色基质鲎试剂盒使用说明(终点显色法，含偶氮化试剂) 货号：T7571 保存：阴凉处， 最佳2-8℃，避光贮存。 产品内容： 细菌内毒素工作品，5支 鲎试剂， 1.7ml/支，5支 显色基质，1.7ml/支，5支 偶氮化试剂1，10ml/支，5支 偶氮化试剂2，10ml/支，5支 偶氮化试剂3，10ml/支，5支 HCl (反应终止剂)， 50ml/瓶，1瓶 细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，3瓶 用途： 显色基质鲎试剂(Chromogenic End-point TachypleusAmebocyte Lysate ， CE TAL )用于 体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。 原理： 鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因 子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下 （温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素 激活C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色 基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺 （pNA，λmax 405nm） 。在一定时间内，pNA 的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。 同时，对硝基苯胺 （pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色 （λmax 545nm），避免了供试 品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。 检测限： 按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1EU/ml 和0.01EU/ml-0.1EU/ml 两个区间(反应时间T 1 和T 2 见出厂检验报告) 。 用法： 1. 材料和设备 1.1 试剂 鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1 、偶氮化试剂2 、偶氮化试剂3、HCl (反应终止剂) 、细菌内毒素检查用水。 1.2 器材 无热原试管、无热原吸头、旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架、恒温水浴 箱 （37±1℃）、分光光度计。 注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。 玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。 2. 供试品的贮存与预处理 备注：若供试品为血液类，请参照我厂配套血液相关处理试剂使用说明书。 2.1 供试品的pH值应在6 - 8之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液、0.1N氢氧化 钠或0.1N盐酸调节。 2.2 若供试品中可能存在鲎实验的干扰物质，处理参见 【供试品的干扰试验】。 2.3 若供试品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖会产生G 因子旁路反应，干扰内毒素 检测），需选用特异性鲎试剂 （我公司提供）。 2.4 若供试品为一些抗菌素如头孢类抗菌素和磺胺制剂会对偶氮染色剂产生偶联反应 而干扰偶氮化显色，需要选用不含偶氮化试剂的试剂盒 （我公司提供）。 2.5 若供试品的本底吸光度值大于0.5，必须对供试品进行稀释后再检测。 2.6 若供试品颜色较深(例如溶血)，或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质)， 必须设置供试品空白管以扣除供试品自身的颜色本底。供试品空白管不加入鲎试剂，以 等体积鲎试剂的溶剂(该处为细菌内毒素检查用水)代替。其余操作同供试品管。 3. 实验操作 3.1 细菌内毒素标准溶液配制 标准曲线所采用的内毒素浓度可以为0.01，0.025，0.05，0.1EU/ml或0.1，0.25，0.5， 1.0EU/ml。稀释方法如下 （以0.1， 0.25， 0.5， 1.0 EU/ml为例）：取细菌内毒素工作 品1支，按细菌内毒素工作品使用说明书稀释为10EU/ml 的内毒素溶液，再稀释为1.0EU/ml 的内毒素溶液，以1.0EU/ml 的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1，0.25，0.5，1.0EU/ml 的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。 表1 内毒素标准溶液配制 内毒素浓度(EU/ml)