细胞生物学实验-Hela细胞培养.pptVIP

　 若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。 　　一、细菌和真菌的清除 　　1、使用抗生素 　　抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。 预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养基。此法在污染早期有效。 　　二、支原体的清除 　　１、用MRA等药物直接处理 　　用MRA（Mycoplasma Removal Agent）处理细胞，每4天换一次液，连续处理15天以确保细胞纯洁健康。　　2、用清洗纯化法清除支原体污染的方法 　　细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤 　　其原理是利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生，所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限，如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。 　　3、药物辅助加温处理 　　先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在40℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。 细胞污染的清除 1、试剂、耗材、器材消毒灭菌 细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。