浙液相色谱讲义八：检测器-原理及操作.pptVIP

检测器 Waters LC School 培训教材 对检测器的要求 高灵敏度 可重现的设置 合适的带宽 快速或可变的时间常数 宽的线性响应 容易使用及保养 自我诊断功能 检测器的种类 衡量检测器的指标 灵敏度∶ S = △R / △Q △R是检测器响应值的增量 △Q是样品量的增量 噪音∶ 没有样品时检测器的最大输出信号 漂移∶ 检测器在一段时间内响应值的变化 线性动态范围∶最大线性相应与最小检出限之比 最小检测限∶样品产生两或三倍于噪音信号时的浓度 信噪比∶S/N 注意∶最小检测限不是一个单纯的检测器指标。它实际上是评价整个色谱系统的指标，包括了色谱系统、分离机理、色谱柱在内的综合性指标，信噪比亦如此 紫外-可见光检测器 基于样品池(S)中的样品对光产生吸收，有信号差 如是可变波长检测器，还有分光系统(光珊) Beers Law - BEER定律 光能量∶ P0 = 透过溶剂的光能量 P = 透过样品的光能量 光通量(透过率%)∶T=P/P0 吸光度∶ A = -log(T)= log(P0/P) 吸光度 = 单位吸光度 × 流动池长度 × 溶液浓度 即∶ A = abc 同紫外检测器灵敏度有关的因素 信号强度(S) 从BEER定律可看出 样品的种类 样品浓度及进样的体积 检测池的长度 所使用的波长，检测器的时间常数 噪音(N) 流动相 所使用的波长，灯的能量 检测器的时间常数 非检测器因素 - 电噪音，泵脉动等 紫外检测器的溶剂影响 不同种类溶剂有其截止波长 溶剂的质量好坏对其截止波长有影响 为何溶剂质量不好? 含紫外吸收的杂质 溶解在其中的氧气 缓冲液溶质的紫外吸收 背景吸收的影响 背景吸收减少线性范围 许多溶剂产生背景吸收 示差折光效应 示差折光效应的危害 产生假的紫外吸收变化∶ 定量误差，光谱图不准确 梯度时严重的基线漂移 梯形池设计（曾用于440/441，490及486检测器） 最初的专利设计 Waters 2487 检测器 用于2487的消除示差折光效应的设计 专利的梯形狭缝设计，消除示差折光效应 同时；进一步提高灵敏度及线性范围 Waters 2487的其他特点： 双通道、高灵敏度 仪器内集成比色皿位置 多种功能，胜任更复杂的工作 MaxPlot，RatioPlot，灯优化软件等 梯形狭缝(TaperSlit? )流动池 不同种类流动池的比较 486的面板及操作 按此键后可调波长 (190nm-600nm) 波长数值显示在面板下面一行 按此键褉环改变面板上面一行显示的内容 Absorbance:吸光度 Reference:参比池的能量 Sample:样品池的能量 调正满刻度量程 对积分输出无作用 调正滤波参数 常设为∶1.0 自动调零 486的Diagnostics操作 按此键后，进入Diagnostics状态 面板下面一行显示∶ddd，按相应的数字可进行不同的校正，常用的如下∶(详细参见操作手册) 4，重新校正波长 12，显示检测器(486)的版本号 13，显示及修改IEEE地址(2-29)，缺省值及非IEEE操作是0 15，正常参比及样品池位置 16，转换参比及样品池位置，常用于制备 20，设置关灯时间 21，设置积分输出的偏置 26，设置扫描参数∶起、止波长，步宽(nm)，停留时间 27，和26号参数一起工作，完成扫描 2487的面板及操作 2487的显示面板 光电二极管矩阵检测器 简称∶PDA(Photodiode Array Detector) 兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息 在收集色谱图的同时，得到光谱图 色谱峰的纯度鉴定，色谱峰的确认 任意波长的再处理 对PDA的要求∶ 色谱的灵敏度 光谱的灵敏度 光谱的分辨率 光电二极管矩阵检测器示意图 Waters的光电二极管矩阵检测器 全新的光路设计 不用聚光镜及各种消色差镜，以减少光路损失 反相梯形光束流动池，用以消除示差折光效应 灵敏度及分辨率的同时提高 分辨率：1.2nm 噪音：±1.5?10-5AU 996与传统光学单元的比较 示差折光效应的影响 从硬件上消除示差折光效应 带来的好处 不损失灵敏度及分辨率 不会因错选参比波长而损失色谱及光谱信息 只需设定如下参数即可操作∶ 波长范围 分辨率 每秒采集的光谱数 操作极为简便 不需费神选择参比波长及其带宽 Waters 996 的操作 996需同2010一起工作 所有的操作在2010上完成 示差折光检测器 Differential Refractive Index Detector Waters 410及2410的日常操作 调整检测器内、外(如有柱温箱)温度 以5ml/min的流速“purge”参比池五分钟 不接色谱柱！ 视室温变化大小，需较长时间的平衡 参数设置按文献值