实验八芦丁含量测定20120425.pptVIP

一、分光光度法的特点二、可见分光光度法与紫外的区别三、分光光度计测定物质含量的原理四、工作曲线法测定芦丁含量五、本次实验注意事项六、仪器的操作;分光光度法的特点（包括紫外和可见） 分光光度法与其他测定方法比较有这样一些特点 1、首先，它的应用广泛，在国际上发表的有关分析的论文总数中，分光光度法占28%，我国约占所发表论文总数的33%。 2、灵敏度高，由于新的显色剂大量合成，并在应用研究方面取得了重要进展，使得测定物质的灵敏??提高。 3、选择性好，目前有些元素只要控制适当的显色条件就可以直接进行光度法测定。 4、准确度高，浓度测量的相对误差在1～3%范围 5、分析成本低，操作简便快速。;可见分光光度法与紫外的区别：;分光光度计测定物质含量的原理： （紫外与可见基本相同） 均采用一个能产生多个波长的光源，通过系列分光装置后产生特定波长的光源，光源透过被测样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，由比尔-朗白定律求得样品的浓度。;实验八 工作曲线法测定芦丁含量;一、实验目的;芦丁又名芸香甙，维生素P，属黄酮类化合物，临床上主要用于治疗脑溢血，高血压，视网膜出血等疾病。 芦丁的含量测定有高效液相色谱法，紫外分光光度法和可见分光光度法。; 黄酮类化合物的结构性质 结构中含有酚羟基和环酮基结构，可与某些金属盐试剂生成有色络合物，在510nm波长处有吸收，用可见分光光度计测其含量。; 1 显色反应的完全程度（取决于）： 介质的pH 显色剂的用量 反应温度 反应时间 ;如何确定反应最佳条件 在建立方法时，需要通过实验确定最佳反应条件，为此改变其中一个因素（例如介质的pH值暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液的吸光值，通过吸光度-pH曲线确定反应的酸度范围，其他几个影响因素的适宜值也可以按这一方法分别确定。;三、实验内容;芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成） 精密移取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml和样品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇使成5.0ml→各精密加入亚硝酸钠溶液（1→20）0.3ml,摇匀，放置6分钟→各加硝酸铝（1→20）0.3ml,摇匀，再放置6分钟。→各加氢氧化钠试液4ml,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。 在510nm波长下测定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶作空白）以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。测定样品的浓度。;芦丁的测定各试剂用量;结果 1、列出浓度C与吸光度A对应表格 2、用作图法绘制芦丁工作标准曲线 3、用计算器回归求标准曲线方程A=()C+( ), 要求r=0.998以上 4、从图中读出芦丁的浓度,并计算瓶中芦丁样品的浓度 5、计算器回归求芦丁样品的浓度并计算瓶中芦丁样品的浓度。;注意事项;四、思考题 相同厚度的各比色皿透光性不一致时，为什么要在经过多次洗涤后各皿透光率差异无改变下才使用校正值？ 工作曲线法和标准对比法分别适用何种情况？从本实验结果看，能否用标准对比法？ ;仪器的操作;