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辣椒红色素的提取和检测 生物与环境实验中心化学实验室 2013.05 一、实验目的 1、了解从辣椒中提取辣椒红色素的基本原理和方法 2、进一步掌握索氏提取、薄层色谱和吸光度测定等操作技术。 红辣椒中含有多种色素，其含量可高达3.2g/100g(成熟的干辣椒)，已知的有辣椒红色素（C40H56O3，M=584.85g·mol-1）、辣椒玉红素（C40H56O4，M=600.85g·mol-1）和β-胡萝卜素，它们都是类胡萝卜素，在结构上都属于二环四萜化合物。辣椒红色素是深红色粘性液体或深胭脂红色结晶的天然食用色素，并具有营养保健作用和抗癌能力。辣椒红色素易溶于乙醇、丙酮、二氯甲烷、植物油而不溶于甘油和水。 二、实验原理 辣椒中含有强烈辛辣味的辣素（辣椒碱），含量一般为 0.2％～0.5％。固态辣椒碱是白色或淡黄色针状晶体，不溶于 水，易溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿。 辣椒碱都是酰胺类化合物，通式为 O OCH3 R－C－NH－CH2－ －OH 其酚羟基具有弱酸性，可溶于NaOH溶液中。用有机溶剂提取 红辣椒中的辣椒红色素过程中，需先除去辣椒碱，提取得到 的辣椒色素经浓缩、干燥后，可用薄层色谱进行分析分离， 由分光光度法测定辣椒红色素的色价及含量。 仪器： 圆底烧瓶(250mL)，索氏提取器，直型水冷凝管，蒸馏 头，层析缸，CMC硅胶薄层板(5×15cm玻璃板)，烧杯(250 mL)，锥形瓶(100mL)，试剂瓶(100mL)，量筒(100mL)，点 滴板1个，温度计(100℃)，电热套，恒温水浴锅，722光栅 型分光光度计，药物天平，电子天平，组织捣碎机，电吹 风，剪刀(公用)，玻棒，铅笔，小尺子(自备)。 试剂： 红辣椒干、95％乙醇，丙酮，石油醚(沸点30～60℃)， 15％NaOH溶液。 材料： 毛细管，沸石，纱布，脱脂棉，滤纸，擦镜纸，pH试 纸。 三、实验仪器与试剂 四、实验步骤 1、辣椒碱的除去 将干的红辣椒剪碎去籽并捣碎，称取20g，加 入180mL（按1︰9的比例）5%NaOH溶液于250mL烧 杯中，在90℃水浴上加热1.5h后，将杯内液体倾倒 于双层纱布上滤去碱液，用水洗涤至中性，挤干， 放入100mL烧瓶中，用50mL95%乙醇浸提备用。 2、辣椒红色素的提取 置于索氏提取器的滤纸筒中装入辣椒，筒上口放一小团脱脂棉；250mL洁净的圆底烧瓶中加入120mL95％乙醇和几粒沸石，加热进行抽提五次以上（提取液颜色很淡时即可停止抽提）后，将提取装置改成常压蒸馏装置，蒸出大部分乙醇（约剩余5～6mL乙醇）。将残液及少量馏出液洗烧瓶的洗涤液倾入已准确称出重量的试剂瓶中，在100℃烘干后称重，计算提取率。 3、薄层色谱分析分离 取少量干燥的辣椒色素于点滴板上，用适量石油醚溶 解。用平口毛细管吸取辣椒色素溶液点样在两个点样原点 上，点样2～5次，点样后的斑点直径小于3mm，用石油醚 (沸点30~60℃)与丙酮10︰1(体积比)的混合液作展开剂展开。 展开后取出薄层板，立即划出前沿位置，电吹风吹干除 去展开剂，轻画出各斑点的位置、观察斑点颜色并计算Rf 值，并根据薄层色谱展开图以及它们的结构确定这三个斑点 的归属。 4、辣椒红色素的色价测定 准确称取0.0020g（精确到0.0002g）辣椒色素，用乙醇 溶解并定容成 25mL，以乙醇作参比，测定460nm处的吸光 度，计算 来确定辣椒红色素的色价，换算 计算辣 椒红色素的含量。 索氏提取器 去除辣素辣椒粉 120mL95％乙醇 沸石2～3粒 90℃水浴1.5h 回收 100℃烘干 计算Rf值 置双层纱布中 自来水洗涤 浓缩液 广囗瓶 辣椒红色素 称量提取率 提取辣椒红色素的实验流程 去除辣素 的辣椒粉 薄层色谱分析 20g辣椒粉 180mL5％NaOH 挤干 50mL95％乙醇浸提 提取2~3h 至提取液 颜色很浅 常压蒸馏 补加沸石 乙醇 测460nm吸光度A 称取0.0020g 乙醇溶解 定容成25mL 少量溶解 点样展开 计算： 换算： 红色素含量 辣椒 红色素 = ×1/100 式中　 460—被测试样为1%, 1cm比色皿,在 最大吸收峰460n