第七章细胞融合及应用.pptVIP

第七章 细胞融合与应用 杂种细胞筛选方法： 1．遗传互补筛选法 2．抗性互补筛选 3．生长特性筛选法 4．物理特性筛选法 5．其它方法 第四节 细胞融合技术应用举例 动物细胞融合—单克隆抗体生产 利用原生质体融合和培养技术培育新植物 微生物原生质体融合构成新菌株 应用2：利用原生质体融合和培养技术培育新植物 1．植物原生质体培养的意义： ① 融合产生体细胞杂种 ② 分离或引入各种细胞器 ③ 导入外源基因 ④ 诱发突变体 ⑤ 研究细胞信息传递、能量转换、物质运输等 ⑥ 研究细胞壁的合成机制 ⑦ 研究膜的功能与细胞膜的相互作用 ⑧ 研究核质关系 ⑨ 研究疾病与抗性机理 2 原生质体制备过程 原生质体的来源: * 植物叶片 取材容易 比较容易用酶解法分离 * 植物根尖组织 可由各种植物的种子萌发后取得 * 植物花粉 产生单倍体原生质体 * 愈伤组织、悬浮培养的细胞 细胞壁容易解离 植物原生质体纯化的方法： 目的：去除破碎的原生质体、末去壁的细胞、细胞器及其他碎片等杂质。 (1) 沉降法 (2) 漂浮法 (3) 界面法 （1）沉降法 原理： 利用比重原理，在具有一定渗透压的溶液中，先进行过滤（44-169μm的筛网），然后低速离心（900-4500r/min，2min)，使纯净完整的原生质体