肝硬化及肝癌患者血清miR--421 miR--500的研究.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 检测不同分级阶段的肝硬化患者以及原发性肝癌患者血清中miR-421以及 miR-500表达水平与正常人群表达水平的差异，从而确定这两种miRNA能否作 为有效的、无侵袭的潜在生物标志物，以用于监测患者病情变化，早期诊断HCC， 延长患者生存时间。探讨不同Child．Pugla分级的肝硬化以及肝细胞癌患者血清 中氨基酸谱的表达水平，为肝病的辅助诊断、营养支持以及氨基酸失衡液的临 床应用提供依据。 方法： 收集2010年12月至2011年7月在天津市第三中心医院肝内科住院的16 例肝硬化患者血清样本，其中Child．Pugh A级4例，Child．Pu．gh B级7例， Child．Pugh C级5例；肝外科住院的8例原发性肝细胞癌患者血清样本，包括中 分化肝细胞癌6例，低分化肝细胞癌2例；预防保健科体检的5例正常人血清 样本。所有肝硬化(Lc)以及肝细胞癌(HCC)患者入院前未曾接受任何药物或 手术治疗，HCC患者均为首次以“肝占位病变”收治入院，术后经过本院病理 科的病理检查确认，包括中分化肝细胞癌6例，低分化肝细胞癌2例。应用Qiagen 公司生产的miRNeasy Mini Kit提取血清中的总RNA，通过RT-PCR对提取的 RNA进行实时定量分析。利用ABI 7000系统分析软件、数据处理软件SPSSl7．0 以及GraphPad Prism4．00图形分析软件对正常组、肝硬化组、HCC组患者之间 血清miR．421、miR．500、AFP、—岍、TBIL的表达水平以及这两种miRNA与 AFP、—U』、TBIL表达水平之间的相关性进行分析。利用L．8900高效液相氨基 酸分析仪对血清样本进行氨基酸谱分析，利用数据分析软件SPSSl 7．0分析不同 实验组血清游离氨基酸谱的差异性。 结果： (1)与正常人相比较，Child．PughA级肝硬化患者血清中miR．421以及miR．500 的表达没有显著性差异(尸l0．05)；Child．PughB级肝硬化、Child．PughC级肝硬 化以及HCC患者血清中miR．421、miR．500的表达有明显上调(氏o．005)，除 Child—PughB级肝硬化、Child—PughC级肝硬化患者血清中miR．500的表达无明 显差异(尸0．05)外，其余各组间比较均有统计学意义(P0．005)； (2)与HCC组相比较，其余各组AFP值均降低，差异性显著；正常组和 天津医科大学硕士学位论文Child—PughA级肝硬化舡r的表达明显下降，差异有统计学意义。与Child．C级 天津医科大学硕士学位论文 Child—PughA级肝硬化舡r的表达明显下降，差异有统计学意义。与Child．C级 肝硬化相比，正常组以及HCC组TBIL表达均下降，差异有统计学意义； (3)miR．421和miR．500的相对表达水平(ACt)与AFP有明显的相关性(严O．557 P=0．002；r=O．566 P=-0．001)；与削Ⅱ的相关性具有统计学意义(严0。640 P=0．000； r=0．646P=0．000)：与TBIL无明显的相关性(严．0．13 P=-0．501：F-=．0．105 P=0．589)； (4)与正常组相比较，Child．PughC级肝硬化患者血清中半胱氨酸CP=O．ooo)、谷 氨酸(P=-O．048)、蛋氨酸(P=-0．001)、酪氨酸水平(P=-0．002)升高，亮氨酸(P=-O．049) 水平下降：与Child．PughA级肝硬化相比，Child．PughC级肝硬化和HCC患者血 清中异亮氨酸水平显著下降(削．005，P=0．006)；与正常人相比，苯丙氨酸在 Child—Pugh C级肝硬化以及HCC组中均表达增力n(P=-O．o002=0．001)，BIR明显 下降(氏o。01)。HCC组比Child．PughC级患者血清苯丙氨酸减少(仁O．032)。 结论： 本研究发现不同Child．Pugh分级的肝硬化以及Child．PughA级的HCC患者 血清中的miR．421以及miR．500的表达存在显著差异，其水平的监测可以判断 肝硬化从轻到重甚至发展为HCC的病情变化，有望成为早期诊断和治疗HCC 的潜在生物标志物。同样，氨基酸水平的变化也为肝病患者的辅助诊断、营养 支持以及治疗奠定了临床基础。 关键词：Child．Pugh分级肝细胞癌微小RNA实时荧光定量聚合酶链反应 氨基酸 II Abstractobjectives： Abstract objectives： To find out the potentially effective and non—inva