生化分离工程复习演示文稿.ppt

* 晶体成长速度大大超过晶核生成速度,过饱和度主要用来使晶体成长, 得到粗大而有规则晶体; 反之过饱和度主要用来生成新的晶核,则所得到的晶体颗粒参差不齐,晶体细小,甚至呈无定形。 在工业生产中,通常都希望得到颗粒粗大而均匀的晶体,可以使后续的过滤、洗涤和干燥操作比较方便,同时产品质量也可提高。 晶体的成长 * 影响晶体生长速度的因素 杂质：改变晶体和溶液之间界面的滞留层特性，影响溶质长入晶体、改变晶体外形、因杂质吸附导致的晶体生长缓慢； 搅拌：加速晶体生长、加速晶核的生成； 温度：促进表面化学反应速度的提高，增加结晶速度； 溶液浓度：浓度始终在介稳区，育晶区 * 晶体质量 大小 形状 纯度 影响晶体质量的因素 * 影响晶体大小的因素 溶液的过饱和度、温度、搅拌速度等。 过饱和度增加,所得晶体细小。 温度的影响比较复杂,当溶液快速冷却时,达到过饱和度较高,所得晶体也较细,而缓慢冷却常得到粗大颗粒。 搅拌能促使成核和加速扩散,提高晶核成长的速度,但超过一定范围后,效果就不显著。相反搅拌越快,晶体越细。? 提高晶体质量的途径 * 同种物质用不同方法结晶时，得到的晶体形状可以完全不同。 从不同溶剂中结晶得到不同的外形。 改变结晶温度，也会改变晶体外形。 影响晶体形状的因素 * 晶体常包含母液、尘埃和气泡。 形成晶簇 通过晶体的洗涤，除去母液 不同的溶剂进行结晶对不同物质洁净程度不同 改善方法：用适当的溶剂，对固体进行洗涤，重结晶 影响晶体纯度的因素 * 一般生化药物结晶条件控制 纯度 ：纯度应不低于50% ，有时虽然纯度不高，若能创造条件，如加入有机溶剂和制成盐等，也能得到结晶。 浓度：一般要求结晶液的浓度较高 ，以利于溶液中溶质分子间的相互碰撞聚合。 pH值：一般选择在生化药物pI附近处，有利于晶体析出。如溶菌酶的5%溶 液，pH9.5～10，在4℃放置过夜便析出结晶 晶种：不易结晶的生化药物常加晶种 * 温度：通常在低温条件下进行。 低温溶解度低，不易变性，避免细菌繁殖。在中性盐溶液和有机溶剂中结晶时，温度可在0℃至室温的范围内选择。 温度过低时，粘度大，结晶慢，可在低温时析出结晶后适当升温。通过降温促使结晶时，如降温快，则结晶粒小，降温慢则颗粒大。 时间：结晶的形成和生长常需要时间，要陈化。 生化制药上要求在几小时之内能完成，时间不宜过长。 * 经过一次粗结晶后，得到的晶体通常会含有一定量的杂质。此时工业上常常需要采用重结晶的方式进行精制。 重结晶是利用杂质和结晶物质在不同溶剂和不同温度下的溶解度不同，将晶体用合适的溶剂再次结晶，以获得高纯度的晶体的操作。 重结晶 * 休息一会儿…… * 此式在单级平衡蒸馏中相当于相对挥发度；在萃取分离中又称为萃取的选择性(selectivity) 比活的定义：在一定条件下，单位质量(mg)的酶在给定的时间内分解底物的umol数[in U/mg] * 此式在单级平衡蒸馏中相当于相对挥发度；在萃取分离中又称为萃取的选择性(selectivity) 比活的定义：在一定条件下，单位质量(mg)的酶在给定的时间内分解底物的umol数[in U/mg] * * * * * * * * 反胶束萃取 反胶束萃取：利用反胶束将目标产物从混合液中萃取出来的纯化技术。 * 反胶束萃取 反胶束是两性表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集而成的，内含微小水滴的，空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。是一种自我组织和排列而成的，并具热力学稳定的有序构造。 * 特点 成本低、溶剂可反复使用、萃取率和反萃取率都很高，具有选择性。 可以解决蛋白质(胞内酶)在非细胞环境中迅速失活的问题， 构成反胶束的表面活性剂往往具有溶解细胞的能力，可用于直接从整细胞中提取蛋白质和酶。 * 临界胶束浓度 (Critical Micelle Concentration CMC) 临界胶束浓度,是胶束形成时所需表面活性剂的最低浓度，用CMC来表示; 与表面活性剂的化学结构、溶剂、温度和压力等因素有关。 CMC的数值可通过测定各种物理性质的突变(如表面张力、渗透压等)来确定。 * 专用表面活性剂 反胶束是表面活性剂分散于连续有机相中一种自发形成的纳米尺度的聚集体，表面活性剂是反胶束溶液形成的关键。 表面活性剂是两性分子，可分为阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子型表面活性剂，都形成反胶束。 * 阴离子表面活性剂 在反胶束萃取蛋白质的研究中，用得最多的是阴离子表面活性剂AOT(AerosolOT)，其化学名为丁二酸－2－乙基己基酯磺酸钠，结构式见图 * 有机溶剂通常采用异辛烷。 表面活性剂AOT能迅速溶于有机溶剂，也能溶于水而形成液晶态（非球状）胶团。 所形成的胶团的含水率高（?0为50－60），比季铵