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生物信号检测及传感器 第二章 传感器生物材料 第一节 分子识别元件及其生物反应基础 一、分子识别元件 生物传感器的分子识别元件又称敏感元件,主要指来源于生物体的生物活性物质（包括酶、抗原、抗体和各种功能蛋白质、核酸、微生物细胞、细胞器、动植物组织）、生物衍生材料以及或生物模拟材料等. 生物传感器的分子识别元件的生物反应原理: 酶及酶反应 人工酶 微生物反应 免疫学反应 分子模版高分子 molecular imprinting polymers 核酸和核酸反应 核酸适配体（aptamers ） 催化抗体(抗体酶) 催化性核酸 二、酶及酶反应 （一）、什么是酶？ 酶是活细胞产生的一类具有催化功能的生物分子，所以又称为生物催化剂Biocatalysts 。 绝大多数的酶都是蛋白质。 酶催化的生物化学反应，称为酶促反应Enzymatic reaction。 在酶的催化下发生化学变化的物质，称为底物substrate。 葡萄糖氧化酶 乙醇脱氢酶 （ADH) 乙醇脱氢酶催化反应时为两分子“机制”。一是锌原子，它结合乙醇分子上的-OH基并定位。另一个是NAD复合因子（由烟酸构成），决定催化反应的特异性 乙酰胆碱脂酶 乙酰胆碱酯酶存在于神经元和肌细胞之间的突触上 作用:将神经递质分子乙酰胆碱降解为乙酸和胆碱 活性中心处在一个深沟中，在沟的基部是一组由丝氨酸-组氨酸-谷氨酸组成的三氨基酸序列,其大小正好可使乙酰胆碱掉入其中。 乙酰胆碱酯酶是人体中反应最快的酶之一，降解一个分子约80 微秒。 (五）、酶生物传感器的种类 1.基于酶促反应的酶传感器 1）.底物浓度 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合后，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。 2）.pH 在一定的pH 下, 酶具有最大的催化活性,通常称此pH为最适pH。 3）.温度 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下,反应速度最大。 2.基于抑制原理的酶生物传感器 能够和酶的必需基团结合，改变必需基团的结构和性质，从而引起酶活性的下降，甚至使酶的活性完全丧失的现象称酶的抑制作用。 能引起抑制作用的化合物则称为抑制剂。酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。 b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 不可逆抑制 抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。 A. 非专一性不可逆抑制 抑制剂与酶分子中一类或几类基团作用，不论是必需基团与否，皆可共价结合，由于其中必需基团也被抑制剂结合，从而导致酶的失活 举例: 巯基酶的抑制 巯基酶: 半胱氨酸残基侧链上的巯基（-SH）为必需基团的一类酶。 重金属离子（Hg2+、Ag+、Pb2+）及As3+可与活性巯基不可逆结合，使酶活性被抑制。此类抑制剂所结合的巯基不局限于必需基团，故又称为非专一性抑制剂。 二巯基丙醇（BAL）或二巯基丁二酸钠治疗巯基酶中毒 B. 专一性不可逆抑制 抑制剂专一地作用于酶的活性中心或其必需基团，进行共价结合，从而抑制酶的活性 举例: 羟基酶的抑制 羟基酶: 以丝氨酸侧链上的羟基(OH)为必需基团的一类酶。 有机磷杀虫剂（敌敌畏、敌百虫）、二战时使用过的毒气DFP等有机磷化合物能专一地与丝氨酸残基上的羟基结合，这类具有专一作用的抑制剂常称为专一性抑制剂。 催化乙酰胆碱水解的胆碱脂酶是羟基酶。有机磷中毒时此酶活性受抑制 临床上用解磷定来治疗有机磷中毒。可夺取已经和胆碱脂酶结合的磷酰基，使酶复活。 人工酶 人工合成的具有酶活性位点的有机分子 包括结合底物的基团和进行催化的功能性基团 由于需要结合分子，因此人工酶是在宿主分子，如环糊精、冠醚、杯芳烃等环状分子的基础上进行设计的 三、微生物反应 (一) 、微生物反应的特点 微生物反应过程是利用微生物进行生物化学反应的过程. 酶在微生物反应中起最基本的催化反应 (三)分析微生物学 定义:是利用微生物完成定量分析任务的学科. 在有些情况下,微生物测定法比化学方法更专一和灵敏,效率亦更高 常用的微生物测定法 细胞增殖法:某些菌体的增殖速度与必需营养物质的浓度成正相关,而抗生素能抑制菌体生长,因此可以根据菌体增殖速度可以测定抗生素类的浓度. 呼