同步荧光光谱法教材.pptVIP

总结： a A + b B ? n C + m D ? = k[A]a [B]b a =1 b = 1 ? = k[A][B] 若样品溶液中含有 A、B 两种荧光体，它们的荧光寿命分别为?A和?B。 如 ，则该组分的发射被抑制 要得到混合物中组分A的稳态光谱，须把检测器相角调节至和组分B正交。这是很费时的，最好得到另外的信息: 先得到任何一组分的稳态荧光光谱，然后调节检测器相角至该荧光光谱和混合物的荧光光谱重叠，则可得到与另一组分正交的相角。 使用任何一组分的纯溶液以确定检测器的相角。 当用相灵敏检测器在各种不同检测器相角测绘样品的相灵敏荧光光谱。对于单一化合物，其荧光峰波长基本上保持不变而与检测器相角无关。如果不是均匀的发射，则荧光峰随着检测器相角而改变，在不同检测器相角得到的相灵敏光谱是鉴别不均匀发射的有力工具。 3、相分辨荧光法与时间分辨荧光法比较 用于荧光参数测量的仪器可分为两大类 稳态测量 steady-state 时间依赖的测量 time dependent 相分辨荧光法与时间分辨荧光法本质上都是时间依赖或时间分辨的测量。 （1）仪器 时间分辨荧光法的局限性 a. 仪器常常非常复杂，常局限于有关专家使用； b. 灵敏度常低于稳态测量。 相分辨法的优点 a. 仪器类似于稳态测量的仪器，使用简单； b. 灵敏度高； c. 数据处理快。 （2）测量参数 a. F(t)-t 曲线 ? 时间分辨 b. m. ?. ? 相分辨 （3）从实验的观点，相分辨有下列优点： 在时间分辨的方法中，测量的延迟信号的去卷积对于计算测量系统的限定时间的响应是必要的，而相分辨法不受此限制； 相分辨法允许不同方向的直接测量。如在各向异性的延迟测量中，平行和垂直偏振成份的? 和 m 的测定； 相分辨法为基于荧光寿命差异的光谱成份之直接分辨提供了一种简单、有效的方法。 二、相分辨仪器设备 与一般荧光分光光度计大致相似，但增加了光调制器及测量相角和去调制因素的设备。 1、光调制器 （1）Kerr 调制器 不能透射UV （2）Pockels调制器 需要较低电压，能透过紫外光，可在连续 可变的频率下操作，但要求高度准直的光，适用于以激光器为光源的相分辨荧光计。 （3）Dedye-Sears 超声波调制器 能透过紫外光，对光准直的要求不太高，可用于各种光源。 2、检测系统 由单色器，光电倍增管，锁定放大器组成。 锁定放大器只检测与参比信号相同频率且具有一定位相关系的信号成份，从而大大提高了信噪比。 三、相分辨荧光的分析应用 1、荧光体两组分混和物中个别组分的荧光光谱的直接记录和荧光寿命的测定 2－对－甲苯氨基－6－萘磺酸（TNS）和6－丙酰－2－（二甲基氨基）萘（PRODAN）混合物在乙醇溶液中 稳态荧光光谱 相灵敏荧光光谱 调整 ?D PRODAN被抑制 TNS的荧光光谱，? = 3.6 ns TNS被抑制 PRODAN的荧光光谱，? = 11.6 ns 当 当 TNS 和 PRODAN 的稳态荧光光谱 TNS-PRODAN混合物的相灵敏荧光光谱 从混合物直接记录下的TNS和PRODAN的荧光光谱 2、溶剂松弛的相分辨 在溶剂松弛过程中，一般情况能量有些降低，松弛态发射光谱红移。但降低温度会使光谱蓝移。 N-乙酰基-L-色氨酸胺（NATA） solvent: 丙稀甘油 （1）不同T下的荧光光谱 （2）相灵敏荧光光谱 在固定?D即t下所得到的荧光光谱 NATA 在丙烯甘油中的荧光光谱 NATA 在丙烯甘油中的相灵敏荧光光谱 4-6 荧光动力学分析法 （Fluorescent Kinetic Analysis) 一、动力学法原理 由于化学反应的速率与反应物的浓度有关，在某些情况下与催化剂的浓度有关，因此可以通过测量反应的速率以确定待侧物的含量。 光度法 电位法 荧光法 测速率 以荧光法监测反应速率，这种方法则称为荧光动力学分析法。 二、同步扫描仪器设备 1、固定波长的荧光光谱的获得 对于以光栅为单色器的荧光分光光度计，只要分别设置激发和发射两个单色器所需的起始波长，并