植物组织培养第6章植物细胞培养.pptVIP

二、单细胞的分离 叶组织是分离单细胞的最好材料， 1、机械法：叶片组织轻轻研碎，匀浆过滤或离心，得到纯化细胞。 特点：细胞不受酶伤害，不会发生质壁分离。 不适用于所有植物 2、酶解法：利用果胶酶处理叶片，使细胞间的中胶层发生降解，分离出具有代谢活性的细胞。 特点：必须对酶溶液给予渗透压保护，防止细胞胀裂。 细胞悬浮培养是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。建立在愈伤组织的液体培养技术基础上。目前已发展到全自动控制的大容积发酵罐的大规模工业生产的连续培养。为研究细胞的生长和分化提供了一个独特的实验系统。 在细胞悬浮培养中，采用生长快、有效成分高、适合悬浮培养的细胞株。筛选细胞株的方法是：（1）从培养的愈伤组织中挑选出外观疏松、生长快的浅色愈伤组织。（2）用振荡或酶法，游离出单个细胞或小细胞团。（3）接种在固体培养基上培养2周。（4）挑选生长快的细胞株并继代培养。（5）取各细胞系的培养物，进行有效成分的测定，筛选出有效成分高而生长较快的细胞株。 一、培养类型和方法 （一）成批培养 指把细胞分数在一定容积的培养基中进行培养，当培养物增殖到一定量时，转接继代，建立起单细胞培养物。它是进行细胞生长和细胞分裂的生理生化研究常用的培养方法。 （1）细胞生长在固定体积的培养基上，直至培养基中的养分为细胞耗尽为止。（2）用适当搅拌