第4章2基因工程.pptVIP

——目的基因的克隆与基因文库的构建 一般来说，目的基因的克隆战略分为两大类： 一类是构建感兴趣的生物个体的基因文库，即将某生物体的全基因组分段克隆，然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆； 另一类是利用PCR扩增技术甚至化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆表达。 A 鸟枪法 B cDNA法 C PCR法 D 化学合成法 E 基因文库的构建 The end ! 应用mRNA差别显示技术（DDRT-PCR） 分离克隆的目的基因 (differential display reverse transcription polymerase chain reaction) 原理： 用3 ’-端锚定引物和反转录酶合成cDNA的第一链；用3 ’-端锚定引物和5’-端10-mer随机引物组成引物对，以反转录第一链为模板进行PCR扩增（DDRT-PCR），在标准的序列胶中电泳2~3小时，可显示出50~100条长度在100~5000bp之间的DNA条带。 3 ’-锚定引物： P.Liang等人设计合成了全部12种不同的引物，用以反转录mRNA，合成第一链cDNA。这种引物通常叫作3-端锚定脱氧核苷酸引物，并用5-T11MN或5