免疫药实验方法药理实验方法.pptVIP

* （3）制备脾细胞悬液：若将取出的脾立即放入0℃冰浴，可明显降低空斑计数；在20℃以下操作，不超过15min，对空斑计数并无影响。 （4）测定抗血清的显斑常数（KD）和抑斑常数（KI），作为空斑计数的校正。 * （5）倾注底层琼脂糖时，一定要将平皿放置水平位置，以便使底层琼脂糖水平光滑。倾上层琼脂糖时，各种细胞成分要充分混匀。不能剧烈震荡，以免出现气泡。水浴温度应控制在47～49℃之间，温度过高使细胞变性；过低使琼脂糖凝固，影响细胞分散。 * 2 分光光度法 【基本原理】 又称SRBC的定量溶血测定法，基本原理同溶血空斑法。但本法可定量测定抗体形成细胞所分泌的抗体，较溶血空斑法精确。同时操作比较简便。 * 【操作步骤】 （1）免疫动物：同前。 （2）制备脾细胞悬液：基本同前，制成5×106/ml脾细胞悬液，或按15mg脾重/ml制成脾细胞悬液。 （3）溶血反应：取试管若干只，每管依次加入脾细胞悬液、0.2％SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5ml，充分混匀，另设不加补体的空白组。置37℃水浴中温育1h，离心3000rpm，5min。 （4）测OD值：取上清测OD413nm。 * 【注意事项】 （1）若使用杂种鼠时，宜将每两只小鼠的脾混合液制备脾细胞悬液，可减少实验误差。 （2）反应系统中其他条件不变时，SRBC浓度可根据受试药的免疫增强or抑制作用作