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Agilent 1260 HPLC 结构及简单操作 Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 内容： 一、 HPLC各模块的原理； 二、开机/关机操作； 三、软件； 一 、 HPLC各模块工作原理及维护 HPLC： 高效液相色谱仪（High Performances Liquid Chromatography）。 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。 关于溶剂 HPLC各模块的工作原理及维护 所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水； 所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用一次性水相/有机相滤膜。 所有溶剂应经过超声脱气； 水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天； 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂； 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂； 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。 泵的注意事项 1，溶剂的过滤、脱气； 2，避免使用腐蚀性溶剂； 3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速—较低的系统压力。 四元泵： 缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。 建议A通道：水； B、C通道： 有机溶剂； D通道： 缓冲溶液。 HPLC各模块的工作原理及维护 自动进样器 样品要干净、经过过滤。 洗针：把样品残留降低到最小限度 HPLC各模块的工作原理及维护 关于恒温柱箱 控制范围：最高80oC，低温低于室温10oC。 左右温度应保持一致。 一定要关闭前面板。 HPLC各模块的工作原理及维护 检测器—DAD 在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关,这样也会影响寿命。同时，打开灯需要预热10min 左右 HPLC各模块的工作原理及维护 检测器—FLD HPLC各模块的工作原理及维护 FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。 开机操作： 1，打开计算机。 2，打开LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-2min。 3，双击桌面上“Instrument 1 Online”图标，进入化学工作站,在工作站打开各工作模块。 4，打开Seal Wash清洗液开关，清洗10min。 5，打开清洗阀，排除系统中的气泡，平衡差不多30min. 6, 拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡30min即可以打样。 关机操作： 1，如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。 2，用纯有机相冲洗系统30min。 3，在工作站上关闭各个模块。 4，退出工作站，关闭计算机。 5，关闭LC各个模块的电源。 二、 开机/关机操作 指示灯状态 每个部件接通电源后 LED灯显示绿色 关机 power off 准备进样 power on 没准备好Not Ready 运行Run 故障Error 驻留Resident Blink 仪器LED 状态显示 电源开关显示 黑Black 黑Black 黄Yellow 绿Green 红Red 黄闪烁Yellow blinking 6种LED仪器状态： 开机/关机操作 每次用过仪器后必须做! 整台液相色谱仪的维护 1. 在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟，此时 必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。 2. 关上排放阀，用90%+10%的水、甲醇溶液冲洗整个系 统，时间为15～20分钟，流量1ml/min。本步骤主要是冲 洗干净系统内其他含盐的部位。 3. 用纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为 1ml/min。本步骤主要是保护色谱柱。 4. 如果未使用缓冲液，上面1、2两步骤可免去，直接用 纯的强溶剂冲洗整个系统，时间为1小时，流量为1ml/min。 开/关机操作 三、实验操作及软件 1、开机、开软件 2、冲柱子：95%甲醇（排气泡）---5%甲醇（排气泡） ---流动相（排气泡）。 3、编辑数据采集方法 4、单针及序列 5、样品采集 6、图谱优化 7、报告 样品前处理 一、提取 1、称样：5.0g 2、提取：高氯酸，超声波，水浴，离心，调pH。 3、萃取：异丙醇-乙酸乙酯 4、浓缩：旋转蒸发仪 二、净化 1、活化：10ml甲醇、3ml水、3ml磷酸二氢钠、3ml水 2、上样：提取液加入柱中，弃去流出液。 3、淋洗：4ml水、4ml乙醇 4、洗脱：6ml乙醇+浓氨水，氮吹干。 三、测定前准备 流动相溶液试样残渣，过膜，得待测液。 * * * * * *