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第二章 原料预处理 一、 学习目的与要求 通过本章学习，要求了解细胞分离、目标产物的释放的各种基本方法，了解各种方法的优缺点和应用范围 。 第一节 细胞分离 微生物发酵或动植物细胞培养后培养液与细胞的分离，结晶体与母液的分离，浸取液与药源固体的分离都需要固液分离，在制药工程中将菌体或细胞与培养液分离是生物分离过程的第一步。 1.1 悬浮液的基本特性 生物细胞培养液基本上属于悬浮液,其中大部分是水,培养液中水的特性与固液分离有密切的关系。 1. 极性： 水分子由于正负电荷的中心不重合，为极性分子。水分子之间由于氢键会发生强烈的缔合作用，如与固体物料表面发生氢键作用，则会强化水分子在物料表面的附着状态而不利于固液分离的进行。2. 粘性： 反映了流体分子间的相互作用，它是温度的函数，改变温度会对分离效率产生显著的影响。3. 表面张力: 表面张力随温度的升高而降低。液体介质的表面张力越大，固液分离越困难，因此，降低水的表面张力，是提高固液分离的有效途径之一。 1.2 悬浮液的预处理：1.预处理的目的： （1）改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的 速度，提高固液分离的效率。 （2）尽可能使产物转入便于后处理的某一相中。 （3）去除发酵液中部分杂质，便于后续操作。2. 预处理的方法： （1）加热法：可降低悬浮液的粘度，加速聚集作用以除去杂 蛋白，破坏凝胶状结构，增加滤饼孔隙度，提高分离效 率。 （2）调节悬浮液的pH值：促进凝聚作用。 1.3 重力沉降（适用于分离较大的颗粒） 重力沉降的先决条件是固相和液相间存在密度差。重力沉降过程中固体颗粒受到重力、浮力和摩擦阻力的作用。 根据斯托克思定律，当浮力、摩擦阻力和重力达到平衡时，球形固体颗粒均速沉降，沉降速度为： 第二节 细胞破碎 当获得澄清的发酵液后，就可从这澄清的发酵液中提取需要的产品。但某些情况下，感兴趣的产品不在发酵液内，而在细胞内部，因此对细胞内物质的提取，必须先把细胞破碎，使胞内物质释放出来，然后再提取产品。 ???? 细胞破碎是指用物理、化学、酶、或机械的方法来破坏细胞壁或细胞膜的方法。 ???? 细胞破碎的方法，主要有机械法和非机械法两大类。 * * 二、 学习指南　 （一） 细胞分离　　了解：重力沉降、离心沉降和过滤的概念。　　理解：离心分离与过滤原理以及提高分离效率的方法。　　应用：采用不同的离心分离、过滤设备对不同的细胞进 行分离。　（二） 细胞破碎　　理解： 各种细胞破碎方法原理、优缺点及其适用范围。 　　应用：采用不同的细胞破碎方法对不同细胞进行不同程 度的破碎。　 （3）凝聚和絮凝： 将化学药剂预先投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使它们聚集成可分离的絮凝体，在进行分离。 特点：使颗粒尺寸增加，增大颗粒的沉降或浮选速率，提高 滤饼的渗透性或在深床过滤时产生较好的颗粒保留作 用。 凝聚：在投加的化学物质（如铝、铁的盐类或石灰等）作用 下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成1mm大小块状凝聚 体的过程。 絮凝：使用絮凝剂（天然或合成的大分子量聚电解质）将胶 体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。 由于菌体细胞的直径很小，沉降速度很慢，因此常需向菌体的料液中加入絮凝剂，使菌体细胞凝聚成较大颗粒后过滤除去。 1.4 离心沉降（适用于分离较小的颗粒） 广泛应用于固液、液液相的分离。 1.离心沉降速度 S = 从该式中可看出： ①当ρs＞ρL，则S＞0，粒子顺着离心方向沉降。 ②当ρs＝ρL，则S＝0，粒子到达某一位置后达到平衡。 ③当ρs＜ρL，则S＜0，粒子逆着离心方向上浮。 离心沉降时，颗粒的相对分子质量越大，沉降系数越大，离心沉降速度越大。 令： S为沉降系数 2.离心分离法 （1）差速离心分离： ??原理: 利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别（大而重的颗粒沉降最快，最先到达底部），在同一离心条件下，沉降速度不同，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分级沉淀。 ??操作过程：一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开，然后将上清液加高转速离心，