第8章细胞培养.pptVIP

* * 第八章 植物器官培养与细胞培养 精品课程 一、器官培养 二、细胞培养 返回 精品课程 一、器官培养 是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 （一）根的培养 利用无性繁殖系的方法，将植物种子进行表面消毒，在无菌条件下萌发，待根伸长后从根尖切取长1.0cm的根尖，接种于培养基中，待侧根生长约一周后，即可取侧根的根尖进行扩大培养。如此反复，就可得到从单个根尖而来的离体根无性系。 离体根培养所用的培养基多为无机离子浓度低的White培养基或其他培养基。 影响离体根生长的因素主要有基因型、培养条件、激素、pH、光照和温度等。 精品课程 精品课程 不定根培养 精品课程 96.6 85.0 65.6 40.0 20.1 98.6 45.6 30.0 25.4 5.2 100 100 85.6 50.3 30.0 5.2 6.78 7.10 7.70 4.35 琼 脂 蛭 石 珍珠岩 河 沙 泥 炭 0.5mg/L 0.2mg/L 长富2 君柚 生根率 40d后的pH 基质 不同基质对苹果离体生根的影响 精品课程 樱桃木生根培养 精品课程 （二）茎尖的培养 根据培养目的和取材大小可分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。所需培养基一般为MS培养基，培养方法一般采用固体培养，也可以用纸桥方法来培养。 影响因素有基因型、外植体的大小、生理状态、芽的生长部位、供试植株的年龄、培养基、褐变、玻璃化、遗传稳定性等。 精品课程 （三）叶的培养 离体叶培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。 直接产生不定芽 由愈伤组织产生不定芽 胚状体形成 其他途径 离体叶组织的茎和芽发生途径 返回 （一）单细胞分离方法 精品课程 1、机械法 利用叶肉组织排列疏松、细胞间接触较少的特点，将叶片轻轻研碎，经过滤和离心，收集和净化细胞。 a、细胞未受酶伤害 b、有利于细胞的生理和生化研究。 优点 二、 植物细胞培养 返回 2、酶法 利用果胶酶、纤维素酶来处理植物叶片或其他外植体，使细胞分离。 3、化学法 利用一些化学药剂游离细胞。如秋水仙碱等。 优点：是可以得到较多的叶肉游离细胞。 精品课程 精品课程 （二）培养方法与影响因素 培养方法 1、细胞悬浮培养 是将植物游离细胞或细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。 大规模培养可分为两种类型，即成批培养和连续培养。 精品课程 特 点 a、生长速度快，适于大规模培养及工业化生产有用的细胞次生代谢物 b、能大量提供分散性好且较为均匀的细胞，用于细胞基础研究、突变体筛选或作为遗传转化受体等 c、大规模悬浮培养成本较高 精品课程 建立细胞悬浮系 精品课程 （1）成批培养 是指细胞接种到一定容积培养基的密封系统中培养，当培养基中主要营养成分耗尽时，细胞即停止生长，完成培养过程的方法。 a、培养系统密闭 b、培养基体积固定c、培养数目、总重 量、DNA含量变化，呈一个“S”曲线 d、使细胞保持对数生长 e、细胞在培养液中分布均匀。 特点