细胞培养工程06细胞培养生物反应器(II).pptVIP

细胞培养工程 南开大学 微混合为主，兼有主体混合效果，氧传质效果较强 高剪切力，适合微生物发酵 高 H/D 反应器可配置多个搅拌桨 WAVE Bioreactor - Cellbags 细胞袋预先消毒，一次性使用，不必清洗 通过支架的摇摆实现主体混合 DO/CO2/pH 控制 0.1 - 500L 细胞培养工程 南开大学 特殊细胞营养物质 - 溶解氧（DO） 细胞生理代谢需要量最大的必需营养物质： 1 C6H12O6 + 6O2 → 6CO2 + 6H2O 氧气以溶解氧（DO）形式在水溶液中存在，常温下溶解度非常低 一个大气压 空气（其中 O2 占 21%） 37oC 培养基溶液（盐类溶质的存在降低其溶解度） 饱和浓度约为 0.21 mM 相较于葡萄糖浓度（如 25 mM），溶解氧不足以满足细胞生长需要，需要不断提供通氧（向反应器内部鼓气，或培养基顶部界面换气） (25 - 0) x 6 / (0.21 - 0) = 714.3 (倍) 细胞膜对氧分子具有通透性，氧分子通过被动扩散进入细胞内部 * 细胞培养工程 南开大学 在不通氧的条件下，DO 耗竭需要多久？ 假设条件： 活细胞密度为 5 x 106 (cells/mL) 细胞比需氧量为 3.2 x 10-13 (moles/cell/hour) 培养基为 100% 空气饱和（一般为 50% 左右），纯氧饱和溶解度为 1.0 mM。 计算（以1000 毫升计算）： 1000 毫升培养液中 DO 的总量为 (1.0 mM x 21% - 0) = 0.21 (mmoles) = 0.21 x 10-3 2. 1000 毫升培养液中总活细胞数量为 5 x 106 (cells/mL) x 1000 (mL) = 5 x 109 (cells) 3. 活细胞每小时的需氧量（假设不随 DO 降低而变化） 5 x 109 (cells) x 3.2 x 10-13 (moles/cell/hour) = 1.6 x 10-3 (moles/hour) 耗尽 DO 所需时间为 0.21 x 10-3 (mles) /1.6 x 10-3 (moles/hour) = 0.13 (hour) * 细胞培养工程 南开大学 反应器通氧与搅拌 Case a： 通气量过高，搅拌速率过低，气泡围绕搅拌轴区域上升，搅拌桨起不到打散和分散气泡的作用（最低搅拌速率）； Case e： 搅拌速率过高，上升气泡会再次回到主体，桨叶与气泡过多接触减少桨叶对液体的拉拽，降低液体主体的能量输入和混合（最高搅拌速率）。 * 细胞培养工程 南开大学 搅拌式生物反应器 – 搅拌器转向 “Pump Down” - 延长气泡停留时间 × * 细胞培养工程 南开大学 氧分子从气泡到细胞内传递步骤 从气相主体扩散到气 - 液界面 迁移并穿过气-液界面 扩散并穿过第一个滞流层（最主要传质阻力），进入流体主体 在主体流体中传递，进入第二个滞流层 扩散并穿过第二个滞流层 进入细胞内部参与生化反应（7） 滞流层 气泡 细胞 流体主体 ⑥ ⑤ ④ ③ ② ① 细胞膜 ⑦ 气 - 液传递 * 传递机制：成分 A 从气相进入液相，浓度梯度从气相到液相，由高到低 气相 CAG A 在气相主体的浓度 CAGi A 在气 - 液界面的浓度 kG A 的气相传递系数 液相 CAL A 在液相主体的浓度 CALi A 在气 - 液界面的浓度 kL A 的液相传递系数 气 - 液传递 * 气相 CAG A 的气相主体浓度 CAGi A 的气液界面浓度 kG A 的气相传递系数 液相 CAL A 的液相主体浓度 CALi A 的气液界面浓度 kL A 的液相传递系数 A 的气相传递速率: a：气液相间界面总面积 A 的液相传递速率: 气 - 液传递 * 气相 CAG A 的气相主体浓度 CAGi A 的气液界面浓度 kG A 的气相传递系数 液相 CAL A 的液相主体浓度 CALi A 的气液界面浓度 kL A 的液相传递系数 a：气液相间界面总面积 问题：难以准确测量！ （1）气-液界面变量 CAGi / CALi / a （2）气、液相传递系数 kG 与 kL 假设： （1）CAGi 与 CALi 的达到平衡 （2）在 CAGi 浓度较低的情况下，CAGi 与 CALi 呈线性关系，m 为分配因子 气 - 液传递 * 细胞培养工程 南开大学 气 - 液传递 * 细胞培养工程 南开大学 体积传递系数 KLa 传质系数（KL） 氧传质阻力的倒数 测定难度 单位液体体积气-液界面面积（a） 受通气量和搅拌速率影响 测