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第九次实验 方法比较试验 方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法做对比，以评价候选方法的准确度。它同时可检测候选方法的恒定误差和比例误差的大小。 教学目的与要求 1.掌握方法比较试验的原理和评价。 2.掌握己糖激酶法测血糖和氧化酶法测血糖的测定原理。 3.熟悉己糖激酶法和氧化酶法测定血清血糖的操作过程。 一、试剂与材料 1.己糖激酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合） 。 2.氧化酶法测定血糖试剂盒（工作液：试剂A、试剂B按2：1混合 ）。 3.半自动生化分析仪。 4.实验血清。 四、方法比较 以葡萄糖已糖激酶法作为参比方法，葡萄糖氧化酶法为候选方法进行比较。 1.收集标本 每天收集高、中、低不同浓度标本8份，5天共40份。 2.测定 将标本编号，分别用两种方法先从1-8顺序测定，再从8-1顺序测定，记录测定结果。重复5天。 3.绘制散点图 以对比方法 的结果为横坐标 被评价方法的结 果为纵坐标绘制 散点图。 4.检查散点图有无明显离群点 （1）分别计算每对结果差值，如： X1-Y1、X2-Y2..... （2）计算所有差值的平均差值。 （3）离群判断 以4倍平均差值作判断限。某对差值超出4倍平均差值则视为离群点，剔除，若有两个离群点，则另做标本补充8分结果。 5.回归及相关分析 根据直线回归分析，求出回归方程y=a+bx及相关系数r。截距a反映恒定系统误差的大小，斜率b反映比例系统误差的大小，相关系数反映两种方法相关性的密切程度，r≥0.975或r≥0.95，可接受。 6.计算系统误差 根据回归方程的a、b值，可以计算候选方法的系统误差（SE）；并与不同医学决定水平（Xc）的允许误差（TEa）作比较。 要求SE=（a+bXc）-Xc 1/2TEa 7.配对t检验 通过统计软件进行配对t检验，t值是方法比较实验中系统误差和随机误差的比值，若tt0.05(v)，表明两种方法间的系统误差和随机误差量相比相差不大，尽管有偏差，但可能由随机误差为主所致，不一定确实存在方法间的系统误差。 请预习： 甘油三脂测定 吸收曲线检测 * * 三、血糖的测定（己糖激酶法已讲） （一）实验原理 Trinder反应: GOD 葡萄糖酸＋2H2O2 氧化酶法 葡萄糖＋2H2O ＋O2 H2O2 ＋4-AAP ＋酚 POD 苯醌亚胺＋2H2O ＋HCl 2.混匀，37℃水浴7分钟，波长 500nm比色。 （二）操作方法 工作液1ml 蒸 馏 水 10ul 葡萄糖标准 10ul 血清 10ul 1. 空白管 标准管 测定管 工作液1ml 混合 混合 3.结果计算 测定管吸光度 GLU（mmol/L)＝ ×5.56 标准管吸光度 GLU（mmol/L)＝ ×5.56 GLU（mmol/L)＝ ×5.56 GLU（mmol/L)＝ ×5.56 4.注意事项 1.新配制的葡萄糖标准液须放置2h以上(最好过夜) ，待变旋平衡后方可应用. 2. 尿酸会干扰过氧化物酶反应，使结果偏低。 3.还原性物质可竞争H2O2,使结果偏低。 4.严重黄疽、溶血及乳糜样血清使结果偏高应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。 Y X ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?