第八章 吸光光度法.ppt

第八章：吸光光度法 化学分析法总结 酸碱滴定法 配位滴定法 氧化-还原滴定法 沉淀滴定法 化学分析法的特点? 化学分析：常量组分(1%), Er 0.1%～0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 8.1.3 光的基本性质 c－真空中光速 3.0 ×108 m/s λ－波长，单位：m,cm,mm,?m,nm,? 1?m=10-6m, 1nm=10-9m, 1?=10-10m ν－频率，单位：赫兹（周）Hz 次/秒 n－折射率，真空中为1 微粒性 h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s ?－频率 E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特) 波粒二象性 结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低。 单色光：具有相同能量(相同波长)的光。 混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起。 光学光谱区 物质对光的选择性吸收 Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱 8.2 光的吸收定律 8.2 光吸收定律 Lambert Law（1760） A = ?bc 1852年Beer‘s Law A = ?bc 4.吸光度(A)、透光率(T)与浓度(c)的关系 摩尔吸光系数(?)的讨论 摩尔吸光系数(ε)的讨论 6.朗伯-比尔定律的适用条件 单色光 应选用?max处或肩峰处测定 2. 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等) 3. 稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强 8.2.3 偏离Lambert --Beer定律的因素 1.光学因素 1) 非单色光的影响 Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的谱带宽度 讨论： 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 结论： 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） 选λmax作为测定波长（Δ?↓，S↑且成线性） 2)反射光和杂散光的影响 杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 3) 非平行光的影响 使光程↑，A↑，吸收光谱变形 亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱Absorption spectra of Methylene blue 8.3 比色法和分光光度法 8.3.3 吸光光度法和分光光度计 分光光度计的主要部件 光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm) 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。 棱镜:玻璃350～3200nm, 石英185～4000nm 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便 单色器 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同 光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池（吸收UV） 紫外区：石英池（不吸收UV） 检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 指示器： 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录 检测器 光电管 光电倍增管 光电倍增管 分光光度计内部光的传播途径 8.4 光度分析法的设计 8.5 光度测量误差和测量条件的选择 8.5.2仪器测量误差 检测计标尺上A与T的关系 若测A时产生微小的绝对差dA，则相对误差Er为：Er=dA/A；A=εbc 当b一定时，两边积分得：dA=εbdc dc为测量浓度时的绝对误差，二式相除： dA/A=dc/c=Er 因c A ，故dc亦正比dA 而测量时Er相等，上式成立。 仪器测量误差 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 8.6 定量分析方法应用 3.应用 3) 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、 6) 药物含量测定—比吸光系数定量 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、