叶绿素a检测指导.doc

叶绿素a检测指导 1.试剂及其配制 1.1丙酮溶液（9+1）：量取900mL丙酮（CH3COCH3）与100mL水混合，保存在棕色试剂瓶中。 1.2碳酸镁悬浮液（10g/L）：称取1g碳酸镁（MgCO3），加水至100mL，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需摇匀。 1.3硅胶 2.测定步骤 2.1样品制备 量取2L～5L海水样品，加入3mL，碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜（Wharman GF/C，Φ0.47mm）或0.445um的纤维素酯微孔滤膜过滤，过滤负压不应超过50kPa。 2.2样品的提取 将过滤了的样品滤膜放入具塞离心管，加10mL丙酮溶液,摇荡，放置冰箱贮存室中14h～24h，提取叶绿素-a。若滤得样品不能及时提取，应将该滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸，置于装有硅胶的干燥器内，贮存在低于1℃的冰箱中。 2.3样品离心离心速度：（3000～4000）r/min；离心时间：10min。 3.样品测定 小心将离心的上清液注入测定池。用丙酮溶液作参比，分别在750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定吸光值。其中，750nm处的测定，用以校正提取的浊度，当1cm测定池光程的吸光值超过0.005时，提取液应重新离心。 4.记录与计算 将测得数据记入测定记录表中，分别把在波长664nm、647nm、630nm上测的吸光值减去750nm下的吸光值，得到校正后吸光值E664、E647、E630.再按下式计算叶绿素a、b、c含量。 Pchl-a=(11.85E664-1.54E647-0.08E630)×v/V·L Pchl-b=(21.03E647-5.43E664-2.66E630)×v/V·L Pchl-c=(24.52E630-1.67E664-7.60E647)×v/V·L 式中：Pchl-a——样品中叶绿素a含量，单位为微克每升（ug/L）； Pchl-b——样品中叶绿素b含量，单位为微克每升（ug/L）； Pchl-c——样品中叶绿素c含量，单位为微克每升（ug/L）； v——样品提取液体积，单位为毫升（mL)； V——海水样品实际用量，单位为升（L）； L——测定池光程，单位为厘米（cm）。