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3. 常用的消毒方法: 煮沸消毒法,巴氏消毒法,紫外线或化学药剂消毒法 常用的灭菌方法: 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 :100kPa 121℃ 15-30min 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要,选择合适方法。 (1)豆浆 (2)游泳池 (3)超净工作台 (4)玻棒、试管、吸管、锥形瓶 (5)培养细菌用的培养皿 (6)无菌水 (7)牛肉膏蛋白胨培养基 (8)接种环、接种针(9)实验操作者的双手 牛奶 接种室、接种箱或超净工作台 接种工具,接种环、接种针或其他金属用具 玻璃器皿(吸管、培养皿) * 三. 实验操作---大肠杆菌的纯化培养 (一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算-称量-溶化-灭菌-倒平板 (二)纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有: 平板划线法和稀释涂布平板法 (冷却至50℃) * 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第2步应如何进行无菌操作? 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 * 菌种的保存 1、临时保藏法: 对象: 温度: 缺点: 2、甘油管藏法: 对象: 温度: 结果分析与评价 课题延伸 (P20) 频繁使用的菌种 4℃(冰箱) 容易被污染或 产生变异 长期保存的菌种 -20℃(冷冻箱) * * 接种环 接种针 * 倒平板 讨论1,2 讨论3,4 * 平板划线法 讨论2,3 * 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么? 操作的第一步灼烧接种环: 每次划线前灼烧接种环: 划线结束后灼烧接种环: 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物; 杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。 及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 * 2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 以免接种环温度太高,杀死菌种。 划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少, 每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 * 涂布器 * 1.培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度? 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 提示:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。 通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基 * 3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么? 平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高, 将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 不要 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 * 选择培养基 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 * * * * 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。 一、微生物 * 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。 一、微生物 ?1.分类 特点:小 简 低 * 病毒的结构 ?2.病毒 * 病 毒 * SARS冠状病毒、 禽流感病毒 * 朊病毒(蛋白质病毒) * 病毒的增殖 * 细菌的外形与大小 ?3.细菌 A. 球菌 B. 杆菌 C. 弧菌 常见的细菌三种典型形态 A B C * 细菌的结构 * 芽孢:细菌形成的椭圆形的休眠体 * 芽孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 芽孢又
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