第12章遗传工程.pptVIP

2、T-DNA标签克隆基因 利用T-DNA插入突变 创造突变体，获取目 标基因或克隆 T-DNA 载体构建 转化植物（T1，T-DNA杂合子)收获T2种子 筛选T2，获突变子，应为3:1分离 确定T-DNA与突变型共分离的个体 产生纯合后代 克隆T-DNA两侧的植物DNA 利用侧翼DNA序列作探针从cDNA文库中钓取基因 基因功能的验证（遗传互补测验，分离的 野生基因转化突变体，回复功能） 图12-12 T-DNA标签克隆基因的基本原理 3、基于PCR的基因克隆 PCR可在数小时内使目的基因片段扩增到数百万个拷贝，可代替一些经载体克隆基因的方法。其原理是根据待扩增基因的序列合成引物，使两个引物序列之间的基因序列获得大量扩增，产生大量的基因拷贝用于研究 4、基因的人工合成 对于已知核苷酸序列、分子量较小的基因可以通过化学合成法制备基因。一般先一段一段地合成，然后将这些小片段连接起来。人工合成基因可以由DNA自动合成仪来完成 四、重组DNA分子 第三节 外源基因的导入 一、农杆菌介导的遗传转化 1、根癌农杆菌(Ti质粒) 2、发根农杆菌(Ri质粒) 发根农杆菌侵染后植物细胞产生许多不定根，这种不定根生长迅速，不断分枝成毛状，故称之为毛状根(发状根) Ri质粒的结构与Ti质粒的结构很相似，可以分为T区、vir区、ori区和其它区域等几个部分。 T区