血清α-淀粉酶（AMS）测定.doc

血清α-淀粉酶（AMS）测定 1. 实验原理 AMS测定采用酶动态比色测定法。所用底物为4,6-亚乙基-?,D-麦芽七糖苷-对硝基苯酚（EPS－G7）。样品中?－淀粉酶分解底物EPS－G7，生成对硝基苯酚（PNP），在405nm处比色，吸光度的上升速率与样品中?-淀粉酶的活力成正比。 2 亚乙基－G5 ＋ 2 G2PNP 5EPS-G7＋5H2O ?-淀粉酶 2 亚乙基－G4 ＋ 2 G3PNP 亚乙基－G3 ＋ G4PNP ?-葡萄糖苷酶 2G2PNP＋2G3PNP＋G4PNP＋14H2O 5PNP＋14G （反应式中PNP：对硝基苯酚；G：葡萄糖） 2. 标本采集与处理： 2.1 病人准备：无特殊要求。 2.2 标本类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆、尿液。 2.3 血清分离 血清或血浆应在收集后尽快分离出来。未酸化的尿液，随机或限时收取。 3. 标本存放：不要用嘴吸取标本或对标本吹气，以免唾液污染标本唾液中的淀粉酶使结果升高。血清淀粉酶在20～25℃稳定一个星期，避免微生物降解作用；在2～8℃时稳定一个月。尿液样品在2～8℃可稳定10天，在15～25℃可稳定2天。对于尿液，酸性pH值可使淀粉酶的稳定性减弱，因此，储存前pH值应调至大约7.0。 4. 标本运输：常温条件下运输 5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血的不能做测定。 6. 实验材料： 6.1 AMS测定试剂盒 （试剂1 6×64 ml ＋ 试剂2 6×16 ml） 6.1.1 试剂组成 试剂1： GOOD’S 缓冲液 pH 7.1 100mmol/L 氯化钠 50mmol/L 氯化镁 10mmol/L ?-葡萄糖苷酶 ≥23KU/L 试剂2： EPS－G7 3mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。 6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 6.1.5注意事项：唾液和皮肤中含有?-淀粉酶，应避免用嘴吸取试剂，避免皮肤接触试剂。试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。 6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：无需手工计算，在37℃每个标本的结果仪器自动以U/L报告。手工测定计算方法为： ?-淀粉酶(U/L) = △A/ min×F 反应总体积（ml）×1000 F = 毫摩尔消光系数×样品体积（ml）×比色杯光径 注：1000＝IU/ml到U/L的转换系数 PNP在405 nm处的毫摩尔消光系数：9.90 12. 参考值范围 血清或血浆 16-108U/L 随机尿液 100-1200U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义：?-淀粉酶是将淀粉降解为麦芽糖的水解酶类。人体内的?-淀粉酶来源于多种器官：胰淀粉酶由胰腺产生并释放到肠道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由肾脏清除并经尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。 检测血清、尿液中?-淀粉酶活力主要用于诊断胰腺功能紊乱和监测并发症的发展。急性胰腺炎发作病人在腹痛开始后的几小时内，血液淀粉酶活力升高，约12小时后达到峰值；并至少在5天后活力回复至参考范围内。由于多种非胰腺疾病如腮腺炎、肾功能不全等也会引起?-淀粉酶的升高，所以?-淀粉酶对胰腺功能紊乱的诊断特