血清低密度脂蛋白胆固醇化学选择性抑制酶测定法.doc

血清低密度脂蛋白胆固醇化学选择性抑制酶测定法 1. 实验原理 以往LDL-C的测定通常用总胆固醇、HDL-C和甘油三酯的检测结果进行综合，经Friedwald公式计算而得[3]。本LDL-C试剂盒为均相方法，省却离心步骤直接检测LDL-C。在反应第一步，LDL被选择性保护，而非LDL脂蛋白被酶处理。第二步中，LDL被释放，由胆固醇酶法显色反应选择性地测定出LDL-C。 1) LDL＋试剂1 LDL被保护 CHECHO HDL,VLDL,乳糜微粒 胆甾烯酮＋H2O2 POD H2O2 H2O 2) 保护的LDL + 试剂2 释放LDL CHECHO LDL-C 胆甾烯酮+H2O2 POD H2O2 ＋H-DAOS＋4-氨基安替比林 醌亚胺染料 注：H-DAOS为：N-(2-羟基-3-丙磺基)-3,5-二甲氧基苯胺 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素抗凝血浆。 3. 标本存放：稳定性：-20℃保存至少可稳定1周。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 威特曼LDL-C测定试剂盒 试剂1；试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用威特曼公司提供的HDL/LDL校准品LDL-C对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal HDL/LDL校准品HDL-C校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 12. 参考值范围 [4] 合适范围 ?3.4mmol/L 高度危险临界值 3.4～4.1mmol/L 高度危险范围 4.1mmol/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2]：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸收[1]，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。 近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物[HMG CoA还原酶抑制剂])临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。 欧洲预防冠心病实施计划推荐：总胆固醇浓度应小于5.0mmol/L，低密度脂蛋白胆固醇浓度小于3.0mmol/L[2]。 14. 操作性能 14.1 线性范围：0.03～10.3mmol/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推