硒检测作业指导书.doc

硒检测作业指导书 1.试剂及其配制 1.1硒标准贮备溶液（0.400mg/ml）:称取0.1405g二氧化硒（纯度99.9%）于50ml烧杯中，用适量水溶解后，移入250ml量瓶中，加盐酸溶液至标线，混匀。 1.2硒标准中间溶液（4.00ug/ml）：量取2.50ml硒标准贮备溶液于250ml量瓶中，加盐酸溶液至标线，混匀。 1.3硒标准使用溶液（0.100ug/ml）：量取2.50ml硒标准中间溶液于100ml量瓶中，加盐酸溶液至标线，混匀。 1.4高氯酸-硫酸-钼酸钠混合溶液：称取7.5g钼酸钠溶于150ml水中，加入200ml高氯酸（ρ=1.66g/ml）和150ml去硒硫酸，混匀。贮于500ml试剂瓶中。 1.5去硒硫酸：量取200ml硫酸（ρ=1.84g/ml），在搅拌下，缓缓加入200ml水中，加30ml氢溴酸（ρ=1.38g/ml），混匀，置沙浴上加热至冒白烟。 1.6盐酸：ρ=1.19g/ml。 1.7 EDTA-盐酸羟胺混合溶液：量取100mlEDTA溶液，10ml盐酸羟胺溶液，加水稀释至1000魔力。 1.8 EDTA溶液（0.2mol/l）:称取37g EDTA于250ml烧杯中，加适量水，加热溶解，冷却后稀释至500ml。 1.9盐酸羟胺（100g/l）：称取10g盐酸羟胺于100ml烧杯中，用水溶解后，并稀释至100ml。 1.10甲酚红指示液（0.4g/l）：称取40mg甲酚红于100ml烧杯中，加少量水及2滴氨水溶液溶解，加水至100ml。 1.11氨水溶液（1+1）：取一定体积氨水（ρ=0.90g/ml）与等体积水混匀。 1.12盐酸溶液：0.1mol/l。 1.13 2,3-二氨基萘（DAN）溶液（1g/l）：称取400mgDAN于500ml烧杯中，加400ml盐酸溶液溶解，然后转入1000ml锥形分液漏斗中，在振荡器上振荡15min使其全部溶解，加入80ml环己烷再振荡5min，静置分层后，收集水相，弃去有机相，如此反复纯化数次，直至有机相的荧光强度降到接近环己烷的荧光强度为止。将纯化后的DAN溶液贮于棕色瓶中，加入环己烷使其覆盖液面约1cm厚，置于冰箱中保存，有效期一个月。 1.14 环己烷：若有荧光杂质需重蒸馏提纯，用过的环己烷重蒸馏后可再使用。 2.绘制工作曲线 a）取6个50ml烧杯，分别加入0ml，0.50ml，1.00ml，2.00ml，3.00ml和4.00ml硒标准使用溶液，加水稀释至约10ml，混匀； b)加5ml混合酸溶液，在沙浴中加热消化至冒浓白烟，至溶液变黄。取下冷却至室温，溶液回复为无色，用水稀至约10ml。加5ml盐酸，将烧杯放在沙浴表面加热至溶液变黄为止。取下冷却至室温； c)将溶液移到50ml比色管中，用少量水洗净烧杯，洗液并入比色管中。加5mlEDTA混合溶液，4~5滴甲酚红指示液。用氨水溶液或盐酸液调节pH为1.5~2.0（粉橙色），加3.0mlDAN溶液，摇匀，置沸水浴中加热5分钟取下冷却到室温。将溶液移入60ml分液漏斗中，用少量洗涤比色管，洗液并入分液漏斗中。加3.0ml环己烷，振摇4min，分层后弃去水相； d)将环己烷层从分液漏斗移入1cm测定池中，在荧光分光光度计上，以376nm为激发波长，520nm为发射波长，环己烷为参比。测定硒的荧光强度Ii，将测定数据记入表中； e)以荧光强度Ii-Io(标准空白)为纵坐标，相应硒含量（ug）为横坐标绘制工作曲线，并计算曲线斜率b和截距a。 3.样品测定 量取5.0ml~50.0ml过滤的水样，于50ml烧杯中，一下按绘制工作曲线步骤测定荧光强度Iw,同时测定分析空白荧光强度Ib。 4.记录与计算 将测得数据记入表中，按式（19）或式（20）计算水样中硒的浓度： ρ=m/v×1000……………………………(19) ρ=[(Iw-Ib)-a]/bV×1000……………(20) 式中： ρ——水样中硒浓度，单位为微克每升； m——硒的量，单位为微克； Iw——水样平均荧光强度； Ib——分析空白平均强度； a——工作曲线截距； b——工作曲线斜率； V——水样体积，单位为毫升。