霉菌和酵母计数操作程序ZL-SOP-QC-702A.docVIP

编码：ZL-SOP-QC-702A 编码：ZL-SOP-QC-702A 霉菌和酵母计数操作程序 1. 目的：建立霉菌和酵母计数的标准操作程序，保证正确操作。 2. 适用范围：本标准适用于霉菌和酵母计数。 3. 职责：质量技术部QC 4. 引用标准：GB-4789.15-2010 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 5. 内容 5.1 霉菌和酵母计数:适合各类食品中霉菌和酵母的计数、 5.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： ⑴ 冰箱：2℃～5℃。  ⑵ 恒温培养箱： 28℃±1℃。  ⑶ 均质器。  ⑷ 恒温振荡器。  ⑸ 显微镜：10×～100×。  ⑹ 电子天平：感量 0.1 g。 ⑺ 无菌锥形瓶:容量 500 mL、250 mL。  ⑻ 无菌广口瓶：500 mL。  ⑼ 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。  ⑽ 无菌平皿：直径 90 mm。  ⑾ 无菌试管: 10 mm×75 mm。  ⑿ 无菌牛皮纸袋、塑料袋。 5.3 培养基和试剂 5.3.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录 A 中 A.1。 5.3.2孟加拉红培养基：见附录 A 中 A.2。 5.4 检验程序 霉菌和酵母计数的检验程序见图1。  5.5 操作步骤 5.5.1 样品的稀释 ⑴ 固体和半固体样品：称取 25 g 样品至盛有 225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10 稀释液。或放入盛有 225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打 2min，制成 1:10 的样品匀液。 ⑵ 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 ⑶ 取 1 mL 1:10 稀释液注入含有 9 mL 无菌水的试管中, 另换一支 1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为 1:100 稀释液。 ⑷ 按 5.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管。 ⑸ 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）， 在进行 10 倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取 1 mL 样品匀液于 2 个无菌平皿内。同时分别取 1 mL 样品稀释液加入 2 个无菌平皿作空白对照。 ⑹ 及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 5.5.2 培养 待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养 5d，观察并记录。 5.5.3 菌落计数 肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。  选取菌落数在 10 CFU～150 CFU 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。 5.6 结果与报告 5.6.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。 ⑴ 若所有平板上菌落数均大于 150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多 不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 ⑵ 若所有平板上菌落数均小于 10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 ⑶ 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于 1 计数。 5.6.2 报告 ⑴ 菌落数在 100 以内时，按四舍五入原则修约，采用两位有效数字报告。 ⑵ 菌落数大于或等于 100 时，前 3 位数字采用四舍五入原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数来表示结果；也可用 10 的指数形式来表示，此时也按四舍五入原则修约，采用两位有效数字。 ⑶ 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。 附录A (规范性附录) 培养基和试剂 A.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂 A.1.1 成分 马铃薯(去皮切块) 300 g 葡萄糖 20.0 g 琼脂 20.0 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1000 mL A.1.2 制法 将马铃薯去皮切块，加1000mL 蒸馏水，煮沸10