粪便隐血试验.pptVIP

实验三 粪便隐血试验 一、邻联甲苯胺法 【目的】 掌握粪便隐血试验（OBT）邻联甲苯胺法的方法及其评价。 【原理】 血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢分解释放新生态氧，将受体邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。 【操作】 1．制备涂片 2．滴加试剂 3．结果判断 4．报告方式 二、单克隆抗体胶体金法 【目的】 熟悉隐血试验的单克隆抗体胶体金检测法。 【原理】 胶体金是由氯化金和枸橼酸合成的胶体物质，具有胶体化的性质，呈紫红色。特制的乙酸纤维膜上含均匀分布的胶体金标记的羊抗人Hb单克隆抗体和无关胶体金标记鼠IgG，膜的上端由上至下依次包被羊抗鼠IgG抗体和羊抗人Hb多抗。检测时，试纸条浸入被检的稀释粪便液中，粪便悬液通过层析的作用，沿着试纸条上行，如粪便 中含有Hb，在上行过程中与胶体金标记羊抗人Hb单克隆抗体结合，待行至羊抗人Hb多抗体线时，形成金标记的抗人Hb单抗-粪Hb-羊抗人Hb多抗复合物，在纸条上显现一条紫红色线，即为隐血试验阳性；试带上无关的金标记鼠IgG随粪便悬液上行至羊抗鼠IgG处时，与之结合形成又一条紫红色线，为阴性对照线（试剂质控线），即隐血试验阳性时试带出现2条紫红色线，如果只显现1条紫红色线为隐血试验阴性，试带无紫红色线出现即说明已失效。 【操作】 1．制备粪便悬液 2．浸试带 3．结果判断 4．报告方式 【注意事项】 1．实验所用的器材用具要清洁、干净无酸碱残留，无铁剂、血迹等污染。 2．试剂 （1）化学法试剂：H202最好新鲜配制，做 标本检测时应做阴、阳性对照试验。 （2）金标试纸质量：如试纸渗透性差，粪液渗透不良，可造成假阴性。 3．结果分析 （1）化学法： ①反应时间不足，尤其温度低时； ② 粪便中存在抑制过氧化物酶的物质； ③粪便留取时间较长，血红蛋白被细胞分解。 （2）胶体金法： ①上消化道出血患者有时可因为血红蛋白经过肠 道消化酶降解变性而不具有原来的免疫原性，单克隆抗体与血红蛋白抗原不匹配； ②消化道出血过多，抗原过剩出现后带现象； ③粪便留取时间较长，血红蛋白被细胞分解。 * *