重庆大学生物分离工程-第三章-初级分离.pptVIP

泡沫分离原理 泡沫分离过程是利用待分离物质本身具有表面活性(如表面活性剂)或能与表面活性剂通过化学的、物理的力结合在一起(如金属离子、有机化合物、蛋白质和酶等)，在鼓泡塔中被吸附在气泡表面，得以富集，藉气泡上升带出溶剂主体，达到净化主体液、浓缩待分离物质的目的。可见它的分离作用主要取决于组分在气－液界面上吸附的选择性和程度，其本质是各种物质在溶液中表面活性的差异。 表面活性剂及其界面特性 表面活性剂溶入溶液后表现出两个基本性质： 1 水溶液中溶解行为是很快地聚集在水面并形成亲水基团在水中，亲油基伸向气相的定向单分子排列，使空气和水的接触面减小，从而使表面张力急剧下降，同时，多余的分子则在溶液内部形成分子状态的聚集体－胶束，并分布在液相主体内； 2 超过表面活性剂形成胶束的最低浓度后，溶液表面张力不再降低,但在相界面上，由于上述定向排列的单分子层的作用，具有选择性的定向吸附作用，会显著地改变原溶液的界面的性质，造成各种界面作用，泡沫分离就是充分利用表面活性剂的界面作用发展起来的一种新型的分离方法。 泡沫分离的操作方式 泡沫分离的操作是由两个基本过程组成：1 待分离的溶质被吸附到气－液界面上；2 对被泡沫吸附的物质进行收集并用化学、热或机械的方法破坏泡沫，将溶质提取出来。因此它的主要设备为泡沫塔和破沫器。 影响泡沫分离的因素 A．待分离物质的种类。 B．溶液的pH值： 溶液的pH值对分离效果有很大的影响。 C. 表面活性剂浓度：表面活性剂的浓度不宜超过临界胶束浓度，但也不能太低，使泡沫层不稳定，太高则使分离效率下降。 D．温度： 首先温度应达到表面活性剂的起泡温度，保持泡沫的稳定性，其次根据吸附平衡的类型来选择温度的高低。 E．气流速度。 F．离子强度。 此外，泡沫的性质、层高、排沫方式、搅拌等也是影响泡沫分离的因素 泡沫分离的应用 生物工程中的应用 A．大肠杆菌的分离 B．酵母细胞的分离 C. 蛋白质和酶的分离浓缩 第三章 初级分离End * * 上式如以饱和度表示，则从S1%增至S2%，需加入克数为上式 上式还可以列成表，更为方便。 实际所需 (NH4)2SO4的饱和度，需通过试验决定。对多数蛋白质，当达到85%饱和度时，溶解度都小于 0.l mg／L，通常兼顾收率与纯度。 典型的硫酸铵盐析过程最适饱和度是35%~55% 20 40 60 80 0 100 总蛋白 目标蛋白质 上清液浓度 饱和度 阴阳离子盐析效果 阴离子盐析效果 ： 柠檬酸＞PO43- ＞SO42- ＞ CH3COO-＞ Cl-＞ NO3-＞SCN- 阳离子盐析效果： NH4+ ＞ K+＞Na+ ＞高价阳离子 硫酸铵： （1） 价廉 ；（2） 溶解度大，稳定蛋白质 ；（3）水解变酸；（4）高pH 释氨，腐蚀；（5）残留产品有影响。 盐析注意事项： （1）稳定pH用磷酸缓冲液 （2）硫酸铵加入后体积变大 （3）选择饱和度 （4）分步盐析 （5）初始蛋白浓度 3.1.3 等电点沉淀 在低的离子强度下，调pH至等电点，使蛋白质所带净电荷为零，降低了静电斥力，而疏水力能使分子间相互吸引，形成沉淀。本法适用于憎水性较强的蛋白质，例如酪蛋白在等电点时能形成粗大的凝聚物。但对一些亲水性强的蛋白质。如明胶，则在低离子强度的溶液中，调 pH在等电点并不产生沉淀。 （1）适用于疏水性强的蛋白质 （2）中性盐浓度增大时，等电点向偏酸方向移动，同时最低溶解度会有所增大。 （3）无机酸通常价格便宜，无毒 （4）蛋白质对低pH敏感，易失活 （5）在调节等电点时，如果采用盐 酸、氢氧化钠等强酸强碱，要注意防止酶的失活或蛋白变性。为了使pH缓慢变动，也可用乙酸、碳酸等弱酸和碳酸钠等弱碱。 酶、蛋白质、核酸、多糖类生化物质的水溶液中加入乙醇、丙酮等水溶性的有机溶剂，它们的溶解度会显著降低，从溶液中沉淀出来。 有机溶剂沉淀的优点是：分辨率比盐析法高，溶剂容易除去并可以回收。缺点是易使酶变性。 3.1.4 有机溶剂沉淀法 加入有机溶剂使溶液的介电常数减小，增加酶、蛋白质、核酸等带电粒子之间的作用力，因相互吸引聚合沉淀。 有机溶剂的加入也使水的极性减小，使两性电解质在溶液中的溶解度降低。 有机溶剂会降低蛋白质分子的溶剂化能力，破坏蛋白质的水化层，使蛋白质沉淀。 有机溶剂沉淀的原理 1 使用有机溶剂沉淀时，操作必须在低温下进行，以减少蛋白质的变性。 2 所用有机溶剂须预先冷却到-10~-20℃； 3 有机溶剂要缓缓加入，防止溶液局部升温。 4 中性盐会增加蛋白质在有机溶液中的溶解度，溶液中的中性盐浓度越高，沉淀蛋白质所需要的有机溶剂浓度也越大 5