葡萄糖OF试验标准操作规程.doc

葡萄糖OF试验标准操作规程 1.目的 规范O∕F试验标准操作规程。 2.原理 又称氧化∕发酵（O∕F）试验，观察细菌对葡萄糖分解过程中是利用分子氧（氧化型），还是无氧酵解（发酵型），或不分解葡萄糖（产碱型）。 3.试剂 3.1 O∕F基础培养基成分 葡萄糖 10g 溴甲酚紫（1.6%水溶液）1.0ml 蛋白胨 20g 琼脂 3g 磷酸氢二钾0.2g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000ml 3.2 制备 上述成分除指示剂外加热溶解后校正pH至7.1，加入指示剂并分装13×100mm的试管，每管2～3ml，置高压灭菌器内，经115℃15分钟的灭菌，即为O∕F基础培养基。最终糖浓度为1%。 4.质控 铜绿假单胞菌ATCC27853开放管为黄色，封闭管为紫色；大肠埃希菌ATCC25922开放管、封闭管均为黄色。 5.操作步骤 从平板上或斜面培养基上挑取少量细菌，同时穿刺接种于2支O∕F试验管，其中1支用滴加溶化的无菌凡士林（或液体石蜡）覆盖培养基液面0.3～0.5cm高度。经37℃培养48小时后，观察结果。 6.结果判断 仅开放管产酸为氧化反应，两管都产酸为发酵反应，两管均不变为产碱型。 7.注意事项 有些细菌不能在O∕F培养基上生长，若出现此类情况，应在培养基中加入2%血清或0.1%酵母浸膏，重做O∕F试验。 8.临床意义 葡萄糖O∕F试验可用于葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型细菌，后者为氧化型细菌。更重要的是用于革兰阴性杆菌的鉴别，肠杆菌科的所有细菌为发酵型细菌，而绝大多数的非发酵菌则为氧化型或产碱型细菌。